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5-aza-dC和丁酸钠对胃癌细胞生长及Runx3基因表达影响的实验研究

作　者: 沈玉玲
导　师: 陈卫昌
学　校: 苏州大学
专　业: 消化内科
关键词: Runx3 DNA甲基化 胃癌细胞 5-氮-2′-脱氧胞苷 丁酸钠
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要


第一部分Runx3基因在胃癌细胞中的表达及其失活机制的初步探讨目的研究Runx3基因在胃癌细胞中的表达情况,并初步探讨其失活机制。方法逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测人胃癌细胞株MKN-28、MKN-45中Runx3基因表达的变化,甲基化特异性PCR(MSP)检测Runx3基因启动子区域甲基化的状态。结果Runx3基因在人胃癌MKN-28细胞中不表达,在人胃癌MKN-45细胞中表达;MSP检测发现MKN-28细胞中仅甲基化序列有扩增产物,Runx3基因启动子区域呈高甲基化状态,而MKN-45细胞中仅非甲基化序列有扩增产物,Runx3基因启动子区域无异常甲基化。结论Runx3基因启动子区域的高甲基化状态可能是Runx3基因在人胃癌MKN-28细胞中失活的重要机制。第二部分5-aza-dC和丁酸钠对人胃癌MKN-28细胞生长影响的实验研究目的探讨去甲基化制剂5-氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-dC)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠(NaB)联合干预对胃癌细胞MKN-28生长的影响。方法四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法观察5-氮-2′-脱氧胞苷、丁酸钠及联合干预对人胃癌MKN-28细胞生长的影响,流式细胞仪(FCM)检测5-氮-2′-脱氧胞苷、丁酸钠及联合干预后人胃癌MKN-28细胞细胞周期及细胞凋亡的变化。结果浓度为2.5、5、10μmol/L的5-氮-2′-脱氧胞苷及1、2.5、5mmol/L的丁酸钠分别作用24、48、72小时均能抑制MKN-28细胞的生长,且此抑制作用具有时间、剂量依赖性(P <0.05),10μmol/L的5-氮-2′-脱氧胞苷及2.5mmol/L的丁酸钠联合干预72小时较单用5-氮-2′-脱氧胞苷及丁酸钠对MKN-28细胞的抑制作用显著增强(P <0.05);PI单染法检测细胞周期发现单用10μmol/L的5-氮-2′-脱氧胞苷作用72小时对细胞周期无影响,而单用2.5 mmol/L的丁酸钠及联合用药作用72小时均可使细胞周期阻滞于G0/G1期(P均<0.05);单用10μmol/L的5-氮-2′-脱氧胞苷和2.5 mmol/L的丁酸钠及联合用药处理72小时诱导的凋亡率分别为(8.3±1.3)%、(20.8±2.4)%、(33.7±3.1)%,对照组凋亡率则为(2.0±0.5)%,药物干预组细胞凋亡率与对照组相比,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论5-氮-2′-脱氧胞苷和丁酸钠均能抑制人胃癌MKN-28细胞的生长,联合干预具有协同作用,且此抑制作用可能与阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡有关。第三部分5-aza-dC和丁酸钠对人胃癌MKN-28细胞Runx3基因表达的影响目的探讨去甲基化制剂5-氮-2′-脱氧胞苷和组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠联合干预对人胃癌MKN-28细胞Runx3基因表达的影响。方法RT-PCR检测5-氮-2′-脱氧胞苷和丁酸钠联合干预后Runx3mRNA的表达, Western Blot检测5-氮-2′-脱氧胞苷和丁酸钠联合干预后Runx3蛋白的表达,MSP检测5-氮-2′-脱氧胞苷干预后MKN-28细胞中Runx3基因启动子区域甲基化状态的变化。结果10μmol/L的5-氮-2′-脱氧胞苷干预人胃癌MKN-28细胞72小时后,Runx3mRNA及蛋白重新表达,基因及蛋白表达相对量分别为0.63±0.05和0.38±0.04,2.5 mmol/L的丁酸钠不能诱导MKN-28细胞中Runx3mRNA及蛋白的表达,10μmol/L的5-氮-2′-脱氧胞苷及2.5 mmol/L的丁酸钠联合干预72小时后,Runx3mRNA及蛋白重新表达,基因及蛋白表达相对量分别为0.86±0.02和0.62±0.02,联合应用比单用5-氮-2′-脱氧胞苷可显著增强Runx3基因及蛋白表达(P均<0.05);10μmol/L的5-氮-2′-脱氧胞苷干预72小时后,MSP检测发现MKN-28细胞中仅非甲基化序列有扩增产物,Runx3基因启动子区域呈去甲基化状态。结论5-氮-2′-脱氧胞苷可诱导MKN-28细胞Runx3基因及蛋白重新表达,丁酸钠不能诱导Runx3基因及蛋白的表达,联合干预对MKN-28细胞Runx3基因及蛋白的表达有协同作用;5-氮-2′-脱氧胞苷可逆转MKN-28细胞中Runx3基因启动子区域的高甲基化状态。

全文目录


中文摘要  3-6
Abstract  6-10
引言  10-15
第一部分 RUNX3 基因在胃癌细胞中的表达及其失活机制的初步探讨  15-27
  材料与方法  15-22
  结果  22-23
  讨论  23-24
  参考文献  24-27
第二部分 5-AZA-DC 和丁酸钠对人胃癌MKN-28 细胞生长影响的实验研究  27-40
  材料与方法  27-30
  结果  30-36
  讨论  36-37
  参考文献  37-40
第三部分 5-AZA-DC 和丁酸钠对人胃癌MKN-28 细胞RUNX3 基因表达的影响  40-49
  材料与方法  40-44
  结果  44-46
  讨论  46-47
  参考文献  47-49
结论  49-50
综述  50-63
中英文对照缩略词  63-64
攻读研究生期间发表和待发表的文章  64-65
致谢  65-66
详细摘要  66-68

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胃肿瘤
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