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番茄细菌性斑点病的病原鉴定和内生生防菌的筛选

作　者: 杨春泉
导　师: 胡方平
学　校: 福建农林大学
专　业: 植物病理学
关键词: 番茄番茄细菌性斑点病 Pseudomonas syringae pv.tomato 病原鉴定内生细菌
分类号: S436.412.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 124次
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内容摘要

番茄细菌性斑点病是一种严重影响番茄产量和品质的病害,由丁香假单胞番茄致病变种引起,能够危害番茄的叶、茎、花、叶柄和果实。2006年在福建省闽清县种植的番茄上发现一种细菌病害,疑是此病害,从病叶和茎杆上共分离到15个细菌菌株,经柯赫氏法则证明均能在番茄上引起相同症状,而且从接种病株上又重新分离到了相同细菌。这15个菌株致病力都无明显差异。经革兰氏染色、培养性状、生理生化特性、16S rRNA基因序列等鉴定,确认为是丁香假单胞杆菌番茄致病变种[Pseudomonas syringae pv.tomato(Okabe)Young,Dye & Wilkie]。生物学特性研究结果表明:番茄细菌性斑点病的病原菌最低生长温度为10℃,最高生长温度为35℃,致死温度49℃,10min,最适生长温度为24-30℃,最适pH值为7.0。内生生防菌研究结果表明:(1)从植物体内分离筛选出28株对番茄细菌性斑点病病菌能形成明显抑菌带或抑菌圈的拮抗细菌,其中以Fq7菌株的拈抗效果最好;(2)对该拮抗菌株进行了形态学和16S rRNA基因序列鉴定,菌株Fq7为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);(3)室内盆载防病结果表明:接种4d时菌株对番茄细菌性斑点病的防效达46.12%,5d时防效达57.30%,7d时防效达62.71%。(4)采用涂抹和浇灌两种方法接种后均能使菌株Fq7进入番茄,两种方法接种后,该菌株均可在番茄体内定殖,同时迅速向接种点上部的未接种的组织器官转移传导。

全文目录

摘要  8-9
ABSTRACT  9-10
1 前言  10-18
  1.1 番茄细菌性斑点病的分布及发生规律  10-11
    1.1.1 番茄细菌性斑点病的分布  10
    1.1.2 番茄细菌性斑点病的症状表现  10-11
    1.1.3 番茄细菌性斑点病的田间发生规律  11
  1.2 丁香假单胞菌番茄致病变种(PST)的研究现状  11-12
    1.2.1 番茄细菌性斑点病的病原形态及生理生化特征  11-12
    1.2.2 番茄细菌性斑点病的致病机理  12
  1.3 番茄品种对细菌性斑点病的抗性研究  12-13
  1.4 番茄细菌性斑点病的防治研究  13
  1.5 番茄细菌性斑点病的生物防治研究  13-14
  1.6 植物内生细菌的研究概况  14
  1.7 植物内生细菌的生物防治研究  14-16
    1.7.1 植物内生细菌的生物防治研究概况  14-15
    1.7.2 植物内生细菌的生物防治作用机制  15-16
  1.8 植物内生细菌的内生定殖研究  16-18
2 番茄细菌性斑点病病原菌的鉴定及部分生物学特性研究  18-36
  2.1 材料与方法  18-27
    2.1.1 培养基  18
    2.1.2 供试菌株  18
    2.1.3 供试植物  18
    2.1.4 病原菌分离纯化  18
    2.1.5 病原菌的致病性测定  18-19
    2.1.6 病原菌的形态观察  19-20
      2.1.6.1 革兰氏染色  19
      2.1.6.2 鞭毛染色  19-20
    2.1.7 马铃薯腐败  20
    2.1.8 烟草过敏反应  20
    2.1.9 生理生化测定  20-24
    2.1.10 碳素化合物的利用和分解  24
    2.1.11 寄主范围测定  24
      2.1.11.1 供试材料  24
      2.1.11.2 试验方法  24
    2.1.12 16S rRNA基因鉴定  24-25
      2.1.12.1 细菌DNA制备  25
      2.1.12.2 16S rRNA基因的PCR扩增及DNA片段回收  25
      2.1.12.3 DNA序列测定及分析  25
    2.1.13 病原菌的部分生物学特性研究  25-27
      2.1.13.1 供试菌株  26
      2.1.13.2 最低温度试验  26
      2.1.13.3 最高温度试验  26
      2.1.13.4 最适温度实验  26
      2.1.13.5 致死温度测定  26
      2.1.13.6 生长最适pH  26-27
      2.1.13.7 细菌生长周期测定  27
  2.2 结果与分析  27-35
    2.2.1 病害症状  27-28
    2.2.2 病原菌分离  28
    2.2.3 病原菌致病性测定  28
    2.2.4 病原菌形态观察  28-29
    2.2.5 病原菌的生理生化性状  29-30
    2.2.6 病原菌对碳素化合物的利用和分解  30
    2.2.7 病原菌寄主范围测定  30-31
    2.2.8 病原菌16S rRNA基因鉴定  31-33
    2.2.9 部分生物学特性研究  33-35
      2.2.9.1 温度试验  33-34
      2.2.9.2 生长最适pH  34
      2.2.9.3 细菌生长周期测定  34-35
  2.3 小结与讨论  35-36
3 番茄细菌性斑点病的内生生防菌研究  36-47
  3.1 材料与方法  36-39
    3.1.1 培养基  36
    3.1.2 供试植物  36
    3.1.3 供试病原菌  36
    3.1.4 内生细菌的分离筛选  36
    3.1.5 拮抗菌的筛选与拮抗能力的测定  36-37
    3.1.6 番茄细菌性斑点病拮抗菌株的鉴定  37
      3.1.6.1 常规鉴定  37
      3.1.6.2 16S rRNA基因鉴定  37
    3.1.7 番茄细菌性斑点病防治测定  37-38
    3.1.8 内生细菌在番茄体内的定殖研究  38-39
      3.1.8.1 抗利福平(Rif)突变菌株的筛选  38
      3.1.8.2 供试菌株的回收及鉴定  38
      3.1.8.3 供试菌株在室内盆栽番茄体内定殖动态测定  38-39
  3.2 结果与分析  39-46
    3.2.1 拮抗病原菌的内生细菌筛选  39-40
    3.2.2 拮抗菌株的常规鉴定  40-41
    3.2.3 拮抗菌株的分子生物学鉴定  41-43
    3.2.4 番茄细菌性斑点病的防治  43-44
    3.2.5 内生细菌在番茄体内的定殖研究  44-46
      3.2.5.1 抗Rif标记Fq7菌株在番茄体内的定殖分离结果  44
      3.2.5.2 抗Rif标记Fq7菌株的培养性状及对病原菌拮抗作用测定  44-46
  3.3 小结与讨论  46-47
参考文献  47-52
致谢  52

番茄细菌性斑点病的病原鉴定和内生生防菌的筛选

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