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赭曲霉制备心血管药物C_（11）α羟基化坎利酮培养条件的研究

作　者: 牟晓然
导　师: 冯雁
学　校: 吉林大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 赭曲霉坎利酮 11α羟基化
分类号: TQ463.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

微生物的11α羟基化作用是甾体转化中最重要的反应,此反应可以在甾体母核的C11α位上引入一个氧原子,能够提高甾体药物的抗炎活性。11α羟基化坎利酮是重要的心血管药物,可以治疗心衰,高血压,水肿,肝腹水等疾病。赭曲霉是一种重要的工业生产菌,此菌对坎利酮有11α羟基化能力。本论文在250 mL摇瓶水平利用赭曲霉进行培养,培养过程加坎利酮进行生物转化。培养结束,抽滤得到湿菌体,加入乙酸乙酯震荡抽提菌体。对抽提液进行结晶和重结晶,并用高效液相检测结晶纯度。对产物结晶进行红外吸收光谱、核磁共振和紫外吸收光谱的检测,结果显示坎利酮C11α位羟基化成功。为进一步提高11α羟基化转化率,采用单因子实验法和响应面分析法对培养条件进行优化研究,并用SAS进行统计分析得到最佳培养基组成和最佳培养条件,底物转化率能够达到90%,比采用基本培养基培养,转化率提高约为20%。

全文目录

提要  4-10
第一章绪论  10-37
  第一节研究意义  10-11
  第二节甾体物质的结构和应用  11-13
    1. 甾体物质的结构  11-12
    2. 坎利酮及其应用  12-13
  第三节甾体的羟基化方法  13-15
    1. 化学合成法  13
    2. 微生物转化法  13-15
  第四节微生物羟基化的机理  15-17
  第五节微生物转化影响因素的研究  17-25
    1. 底物传质的研究  17-20
      (1) 关于底物处理方面的研究  18-20
      (2) 针对菌体方面提高传质的研究  20
    2. 羟基化酶的预诱导  20
    3. 培养条件的影响及其优化  20-25
      (1) 培养基组成的影响  21-22
      (2) 培养条件的影响  22-23
      (3) 培养条件的优化方法  23-24
      (4) 补料的研究  24-25
  第六节微生物转化工艺的研究  25-27
    1. 一步转化法  25
    2. 静息细胞转化法  25-26
    3. 细胞稀释工艺  26
    4. 协同转化法  26
    5. 固定化转化法  26
    6. 无细胞体系转化法  26-27
    7. 双水相反应体系  27
  第七节本论文的研究内容  27-28
  第八节参考文献  28-37
第二章赭曲霉制备C11α羟基坎利酮初步研究  37-54
  第一节引言  37
  第二节材料  37-39
    1. 仪器设备  37-38
    2. 菌种  38
    3. 试剂  38
    4. 培养基配制  38-39
      (1) 孢子斜面培养基  38
      (2) 菌体斜面培养基  38-39
      (3) 保护培养基  39
      (4) 生长和转化培养基  39
  第三节实验方法  39-42
    1. 实验流程  39-40
    2. 菌种活化  40
    3. 菌种保存  40
    4. 生物转化  40
    5. 产物抽提、结晶  40-41
    6. 产物分析  41-42
      (1) 紫外吸收光谱的测定  41
      (2) HPLC测定  41-42
      (3) 红外光谱的测定  42
      (4) 核磁共振波谱的测定  42
  第四节结果与讨论  42-51
    1. 抽提效率实验结果分析  42-45
    2. 产物和底物的紫外吸收光谱谱图  45-46
    3. 产物的高效液相谱图  46
    4. 底物和产物的红外吸收光谱谱图  46-47
    5. 核磁共振波谱结果分析  47-51
  第五节小结  51-52
  第六节参考文献  52-54
第三章赭曲霉培养条件优化的研究  54-74
  第一节引言  54
  第二节材料  54-56
    1. 仪器设备  54
    2. 试剂  54-55
    3. 培养基配制  55-56
      (1) 孢子斜面培养基  55
      (2) 菌体斜面培养基  55-56
      (3) 保护培养基  56
      (4) 生长和转化培养基  56
  第三节实验方法  56-62
    1. 培养基的优化  56-59
      (1) 碳源单因子实验  56-57
      (2) 氮源单因子实验  57
      (3) 培养基的响应面法优化  57-59
      (4) 葡萄糖最佳含量实验  59
      (5) 优化后培养基验证  59
    2. 培养条件的优化  59-60
      (1) pH对转化率的影响  60
      (2) 接种量对转化率的影响  60
    3. 底物方面的研究  60-62
      (1) 菌体生长曲线的测定  60
      (2) 底物预诱导的研究  60-61
      (3) 不同溶剂对转化率的影响  61-62
    4. 物料加入方式的研究  62
  第四节结果与讨论  62-70
    1. 培养基的优化  62-66
      (1) 碳源单因子实验结果  62-63
      (2) 氮源单因子实验结果  63-64
      (3) Plackett-Burman实验结果  64-65
      (4) 葡萄糖最佳含量实验结果  65
      (5) 优化培养基验证  65-66
    2. 培养条件的优化  66-67
      (1) pH对坎利酮羟基化的影响  66-67
      (2) 接种量对坎利酮羟基化的影响  67
    3. 底物方面的研究  67-69
      (1) 菌体生长曲线  67-68
      (2) 底物预诱导对坎利酮羟基化的影响  68
      (3) 不同溶剂溶解底物对羟基化的影响  68-69
    4. 物料加入方式的研究  69-70
  第五节小结  70-71
  第六节参考文献  71-74
第四章创新点与展望  74-75
  创新点  74
  展望  74-75
摘要  75-77
Abstract  77-79
致谢  79-80
作者简历  80

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