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肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic E.coli,EHEC)是一种肠道致病菌,1983年,Riley在美国Michigan和Oregon的一起出血性肠炎暴发中首次分离到,同年由Karmali等人分离得到O157:H7血清型。O157:H7主要通过食用被污染的食物传染,它可造成肾功能不全,溶血性尿毒综合征(HUS)、血栓性血小板减少性紫癜(TTP),个别患者可因急性和慢性肾功能衰竭而死亡。近年来,由于新发现的病原微生物和重新抬头的病原微生物导致的传染病是卫生界关注的重大问题,微生物进化是导致新的病原体出现的内在因素。在细菌进化过程中既可以获得对抗生素的耐药性或毒力,也可以缺失一部分基因增强生命力,由弱毒菌变成强毒菌。本研究中针对细菌进化过程中的这些特点,在齐小保博士基因芯片筛查结果分析的基础上,利用Cluster和TreeView软件,将发生基因缺失的菌株进行分类,分为A1、A2、B和KM类,选取人21,65,143,223,248,五株1999年徐州人群爆发的源于病人的菌株以及A2类10株菌作PCR验证,结果显示:1.人21,65,143,223,248,cva120,882364,050岛z1797,1799,1800基因全部缺失;人21,65,143,223,882364,076岛z2970,2971,2972,2973,2974,2976,2977,2978,2979,2980发生全部缺失,人248,cva120,076岛未发生缺失,但它们stxl发生了缺失。2.A2类菌株中O45、O50、O93、O108的部分基因发生了普遍缺失,其中与代谢相关的基因有17个;与基因水平转移相关的基因有26个;与结构蛋白相关的基因有7个;与调节相关的基因有9个;未知功能的基因有12个。在基因芯片筛查中以及PCR检测中发现,在1999、2000年徐州、安徽、河南、日本的15份病人或动物标本中O50岛有Z1797、Z1799基因的普遍缺失;而在大肠杆菌O157:H7 EDL933的全序列注释中,O50岛z1824与CNF2氨基酸序列有31.29%的同源性:基于以上两点,我们有必要对出血性大肠杆菌O157:H7的O50岛进行功能初探,在本研究中,首先从z1824入手,成功构建了pET-30a(+)-z1824表达载体,并通过克隆子测序、双酶切、PCR鉴定以及SDS-PAGE和Western-Blot证实表达的蛋白为O50岛Z1824,在此基础上,参考细胞坏死毒素的致病性,进行了Hela细胞毒性实验,结果显示:在重组蛋白Hela细胞毒性的初步研究中发现有少数Hela细胞发生了多形核的变化,符合细胞坏死毒素的Hela细胞毒的特点,然而作用效果还不是很显著,尽管如此,本研究仍然为后续对O50岛的深入研究提供了非常有价值的资料以及为细菌进化等方面提供了一些线索。
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