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两种石斛植株再生体系构建及形态发生的研究

作　者: 陈娜
导　师: 方炎明
学　校: 南京林业大学
专　业: 植物学
关键词: 大苞鞘石斛美花石斛再生体系形态发生拟原球茎愈伤组织
分类号: S567.239
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

本文介绍了石斛的利用价值,综述了国内外在石斛离体培养和快速繁殖方面的研究现状。在此基础上,以大苞鞘石斛和美花石斛为材料,进行再生体系的构建和形态发生方面的研究与探讨,主要结论如下:①侧芽灭菌适宜的方法:75%的酒精浸泡30s,无菌水冲洗2-3次,再用0.1%的升汞(加两滴Tween20 )溶液消毒8-10min,用无菌水冲洗4-5次。②大苞鞘石斛种子萌发的适宜培养基为MS+6-BA(0.5-1.0)mg/L+NAA0.1 mg/L或者选用N6+6-BA (2.0-3.0mg/L)+NAA0.4mg/L。适宜大苞鞘石斛不定芽诱导和增殖的培养基分别为:MS或N6+6-BA4.0mg/L+NAA0.5mg/L和1/2 MS+ 6-BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L。美花石斛芽诱导和增殖的适宜培养基分别为:MS或1/2MS+6-BA 3.0mg/L + NAA 0.3或0.4mg/L和MS + 6-BA 6.0mg/L+NAA0.2 mg/L。③大苞鞘石斛适宜的拟原球茎诱导和增殖分化的培养基分别为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA0.5mg/L+TDZ0.025mg/L+CH1g/L+CM10%(v/v)或MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0.5mg/L+KT2.0mg/L+CH1g/L+CM10%(v/v)。④大苞鞘石斛愈伤组织诱导的适宜培养基为1/2MS+6-BA1.0mg/L+2,4-D 2.0mg/L,适宜美花石斛愈伤组织诱导的培养基为1/2MS+ 6-BA1.0mg/L + 2,4– D 0.5 mg/L.以大苞鞘石斛无菌苗进行愈伤组织诱导时发现,只有幼嫩组织才能诱导出愈伤,对美花石斛愈伤组织的诱导也得到相似结果,成熟茎段及叶片很难脱分化。⑤石斛植株再生有两种途径:直接发生和间接发生。本实验通过组织细胞学方法研究拟原球茎和愈伤组织发生过程的形态变化,发现诱导出的愈伤组织可分为两种,即胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织。非胚性愈伤组织边缘的细胞逐渐会向胚性愈伤组织状态转化,两种愈伤组织往往同时发生。胚性愈伤组织上可直接形成体细胞胚,体细胞胚与胚性愈伤组织之间通过胚柄结合,体胚发育成原球茎后很容易从胚性愈伤组织上脱落下来。

全文目录

致谢  3-4
摘要  4-5
Abstract  5-10
第一章文献综述  10-22
  1 石斛属植物的生物学特性  10-11
    1.1 石斛属植物的形态学特征  10
    1.2 石斛属植物的地理分布  10
    1.3 石斛属植物的生态习性及繁殖法  10-11
  2 石斛属植物的利用价值  11-12
    2.1 石斛属植物的观赏价值  11
    2.2 石斛属植物的药用价值  11-12
  3 植物组织培养的技术回顾  12-15
    3.1 植物组织培养技术的发展历史  12-14
      3.1.1 理论准备阶段  12-13
      3.1.2 技术建立阶段  13
      3.1.3 迅速发展阶段  13-14
    3.2 植物组织培养的理论基础  14
      3.2.1 植物细胞全能性  14
      3.2.2 全能性的表达  14
      3.2.3 全能性的实现  14
    3.3 植物组织培养中体细胞胚胎发生的研究  14-15
      3.3.1 体细胞胚胎发生的特点  15
      3.3.2 体细胞胚胎发生的培养过程  15
  4 石斛属植物组织培养研究现状  15-20
    4.1 石斛属植物组织培养研究现状  15-20
      4.1.1 培养条件方面的研究  15-17
      4.1.2 人工种子研制  17
      4.1.3 种质低温保存  17
      4.1.4 次生代谢产物的积累及石斛毛状根的诱导  17-18
      4.1.5 原球茎发生过程的研究  18-19
      4.1.6 遗传转化  19
      4.1.7 石斛属植物离体成花的研究进展  19-20
    4.2 石斛属植物组织培养的意义  20
  5 本研究内容意义及技术路线  20-22
    5.1 本研究的内容  20-21
    5.2 本研究的目标及意义  21-22
第二章大苞鞘石斛再生体系的构建及形态发生的研究  22-44
  1 大苞鞘石斛种子发育过程的研究  22-29
    1.1 实验材料  22-23
    1.2 实验方法  23-24
      1.2.1 材料处理  23
      1.2.2 培养基与培养条件  23-24
      1.2.3 大苞鞘石斛由种子到原球茎发育过程的观察  24
    1.3 结果与分析  24-29
      1.3.1 不同材料及其消毒方式对大苞鞘石斛种子萌发的影响  24-25
      1.3.2 不同培养基对大苞鞘石斛种子萌发的影响  25-27
      1.3.3 不同光照条件对大苞鞘石斛种子生长的影响  27
      1.3.4 大包鞘石斛种子及种子萌发过程的光电镜观察  27-29
  2 大苞鞘石斛侧芽的诱导及增殖  29-34
    2.1 实验材料  29
    2.2 实验方法  29-31
      2.2.1 大苞鞘石斛茎段的灭菌  29
      2.2.2 侧芽诱导培养基的筛选  29-30
      2.2.3 侧芽增殖培养基的筛选  30-31
    2.3 结果与分析  31-34
      2.3.1 不同消毒方式对污染率的影响  31-32
      2.3.2 不同培养基对侧芽诱导的影响  32-33
      2.3.3 侧芽增殖培养基的筛选  33-34
  3 大包鞘石斛拟原球茎的诱导，增殖及分化  34-37
    3.1 大苞鞘石斛拟原球茎的诱导  34-35
      3.1.1 实验材料  34
      3.1.2 实验方法  34-35
    3.2 大苞鞘石斛拟原球茎的分化  35
    3.3 结果与分析  35-37
  4 大苞鞘石斛愈伤组织的诱导  37-38
    4.1 实验材料  37
    4.2 实验方法  37-38
    4.3 结果与分析  38
  5 大苞鞘石斛由愈伤组织到拟原球茎发育过程的电镜观察  38-39
    5.1 实验材料  38
    5.2 实验方法  38
    5.3 结果与分析  38-39
  6 大苞鞘石斛的生根培养及炼苗移栽  39-42
    6.1 不同激素及浓度对大苞鞘石斛试管苗生根的影响  39-40
    6.2 炼苗及移栽试验  40
    6.3 结果与分析  40-42
      6.3.1 生长调节物质对大苞鞘石斛试管苗生根的影响  40-42
      6.3.2 炼苗移栽  42
  7 小结  42-44
第三章美花石斛再生体系的构建及形态发生研究  44-56
  1 美花石斛的引种  44-45
    1.1 实验材料及方法  44
    1.2 结果与分析  44-45
  2 美花石斛的侧芽诱导及增殖  45-49
    2.1 实验材料  45
    2.2 实验方法  45-47
      2.2.1 美花石斛茎段的灭菌  45-46
      2.2.2 侧芽诱导培养基的筛选  46
      2.2.3 侧芽增殖培养基的筛选  46-47
    2.3 结果与分析  47-49
      2.3.1 不同消毒方式对污染率的影响  47-48
      2.3.2 侧芽诱导培养基的筛选  48
      2.3.3 侧芽增殖培养基的筛选  48-49
  3 美花石斛拟原球茎的诱导，增殖及分化  49-51
    3.1 美花石斛拟原球茎的诱导  49-50
      3.1.1 实验材料  49
      3.1.2 实验方法  49-50
    3.2 美花石斛拟原球茎的增殖与分化  50
    3.3 结果与分析  50-51
  4 美花石斛愈伤组织的诱导  51-52
    4.1 美花石斛愈伤组织的诱导培养基的筛选  51
    4.2 结果与分析  51-52
  5 美花石斛的生根培养及炼苗移栽  52-54
    5.1 不同激素及浓度对美花石斛的生根影响  52-53
    5.2 炼苗及移栽试验  53
    5.3 结果与分析  53-54
      5.3.1 生长调节物质对美花石斛试管苗生根的影响  53-54
      5.3.2 炼苗移栽  54
  6 小结  54-56
第四章主要结论研究特色与展望  56-59
  1 主要结论  56-57
  2 本研究特色和展望  57-59
    2.1 本研究特色  57-58
    2.2 展望  58-59
图版  59-73
参考文献  73-78
详细摘要  78-81

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