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肾康注射液拮抗马兜铃酸对人近端肾小管上皮细胞的作用

作　者: 沈水娟
导　师: 谌贻璞
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 内科肾脏病学
关键词: 肾小管上皮细胞硕士研究生论文马兜铃酸医科大学蛋白质表达肾间质协和肾小管间质间质纤维化结缔组织生长因子
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

研究目的含马兜铃酸(aristolochic acid，AA)成分的中草药能够导致慢性马兜铃酸肾病(chronic aristolochic acid nephropathy，CAAN)，病理特点为进行性寡细胞性肾间质纤维化。CAAN近年来受到广泛关注。但是，CAAN的发病机制尚未完全清楚，更缺良好治疗方法。肾康注射液(shen kang injection，SKI)是一种治疗慢性肾衰竭的复方中药注射液，它含有丹参、红花、大黄及黄芪等成分。既往实验研究表明，SKI能改善肾小球硬化和肾间质纤维化，改善肾功能，延缓慢性肾脏病的进展。本研究目的在于探讨SKI能否拮抗AA的促间质纤维化作用。方法分别用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测马兜铃酸钠盐(AA-Na)和(或)SKI对人近端肾小管上皮细胞(HKC)的增殖及毒性作用。用RT-PCR法检测(孵育细胞12h检测)HKC中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor，CTGF)、金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1)以及纤溶酶原激活物抑制物-1(plasminogen activatorinhibitor-1，PAI-1)的mRNA水平，ELISA法检测(孵育细胞24h检测)细胞上清TGF-β1、TIMP-1、PAI-1蛋白水平，免疫印迹法(Western blotting)检测(孵育细胞36h检测)细胞CTGF蛋白表达。结果通过MTT和LDH实验证明，10 mg／L AA-Na或(和)8 mg／ml SKI既不影响HKC增殖也无细胞毒性，故用于本实验研究。RT-PCR检测显示，10 mg／LAA-Na能显著上调HKC中TGF-β1、CTGF、TIMP-1、PAI-1的mRNA表达，分别增达1.84，1.58，1.62，1.29倍(P＜0.05)；加入8mg／ml SKI后，上述TGF-β1、CTGF、TIMP-1及PAI-1 mRNA的高表达均被显著抑制，抑制率分别为41.6％，43.7％，43.8％及24.4％(P＜0.05)；而SKI对上述因子mRNA表达无作用(P＞0.05)。ELISA检测显示，AA-Na 10mg／L能显著上调HKC上清中TGF-β1、TIMP-1及PAI-1的蛋白质表达，分别增达1.12，1.63，1.42倍(P＜0.05)；加入8mg／ml SKI后，上述TGF-β1、TIMP-1及PAI-1的蛋白质高表达均被显著抑制，抑制率分别为34.3％，43.3％及31.1％(P＜0.05)；而SKI对上述因子蛋白质表达无作用(P＞0.05)。Western blotting检测显示，AA-Na 10mg／L能显著上调HKC细胞层的CTGF蛋白质表达，增达1.29倍(P＜0.05)；加入8mg／ml SKI后，CTGF的蛋白质高表达被显著抑制，抑制率为21.9％(P＜0.05)。8mg／ml SKI自身对HKC的TGF-β1、CTGF、TIMP-1、PAI-1 mRNA及蛋白质表达无任何效应。结论AA-Na能刺激HKC显著上调促细胞外基质(extracellular matrix，ECM)合成因子(TGF-β1、CTGF)及抗ECM降解因子(TIMP-1、PAI-1)的mRNA及蛋白质表达，而SKI能拮抗AA-Na的上述作用。

全文目录

缩略语表  4-6
中文摘要  6-9
英文摘要  9-12
论文正文  12-57
  前言  12-14
  肾康注射液拮抗马兜铃酸对人近端肾小管上皮细胞的作用  14-52
    材料和方法  14-36
    结果  36-48
    讨论  48-51
    小结  51-52
  参考文献  52-57
文献综述  57-83
  马兜铃酸肾病的发病机制及治疗的研究进展  57-74
  参考文献  74-83
致谢  83-85
个人简历  85-86

肾康注射液拮抗马兜铃酸对人近端肾小管上皮细胞的作用

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