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人类精子穿卵试验（SPA）的精液质量因素影响夫精宫腔内人工授精（IUI）效果研究

作　者: 马川花
导　师: 李跃民
学　校: 西南大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 人类精子穿卵试验(SPA) 精子质量 宫腔内人工授精(IUI)
分类号: R321-33
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 68次
引　用: 1次
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内容摘要


精子穿过金黄地鼠去透明带卵试验(SPA)是一项最重要、最可靠的男性精子功能检查技术,同时也是目前为止能为临床医生指导不孕不育患者是否选择夫精宮腔内人工授精(IUI)提供最直接依据的一项技术。但该技术操作由于环节过多,影响其在临床应用中的推广和普及。因此,选择质量不同的人类精液,系统研究SPA技术,简化和规范该技术的操作程序对人类辅助生殖技术的应用具有重要意义。本实验以SPA为主线,研究了压片法和低渗法观察SPA的卵母细胞受精效果,精子密度和精子前向活动率、精子头部表面膜完整性、精子顶体酶活性、精子形态对SPA值的影响。通过试验确定选择IUI的SPA值。根据对实验数据的分析,得到以下几点结论:1、低渗法与压片法相比,低渗法(133.4±12.1 s/个受精卵)在观察受精卵是否受精时的耗时显著低于压片法(210±13.4 s/个受精卵)(p＜0.05),而两者的受精率(49.2±3.3%vs 49.1±5.7%)无显著差异(p＞0.05)。2、精子密度和精子前向活动率(24.42±2.11x10~6/ml,26.23±1.20x10~6/ml,30.14±1.13x10.6/ml,33.75±1.69x10~6/ml;22.83±2.41%,24.23±1.01%,29.17±1.55%,27.32±2.10%)对SPA值(SPA＜10%,11%＜SPA＜30%,31%＜SPA＜50%,SPA＞51%)无显著影响(p＞0.05)。3、精子头部表面膜完整性(62.1±10.3%v3 75.6±12.1%)对SPA值(SPA＜10%,11%＜SPA＜30%,31%＜SPA＜50%,SPA＞51%)影响显著(p＜0.05)。4、精子头部、颈部和尾部畸形(31.3±12.1%vs 28.7±15.1%;19.4±8.3%vs 22.6±10.1%;15.5±7.1 vs 17.1±5.5%)对SPA值(SPA＜30%,SPA＞31%)无显著影响(p＞0.05)。5、精子顶体酶活性(88.29±9.77μIU/10~6个精子vs 248.30±14.5μIU/10~6个精子)对SPA值(SPA＜30%,SPA＞31%)影响显著(p＜0.05)。6、以SPA检查为依据对患者进行IUI的妊娠率(16.17±1.12%vs 21.08±0.93%)显著提高(p＜0.05)。综上所述,精子密度、精子前向活动率和精子头部、颈部和尾部畸形状况对SPA值无显著影响,也即精子密度、精子前向活动率和精子头部、颈部和尾部畸形状况对判断精子是否具有受精能力的意义不大;精子头部表面膜的完整性和精子顶体酶活性在一定程度上可以反映精子的受精能力;SPA检查结果可以作为临床医生指导患者是否选择IUI的重要依据;而在SPA操作中观察卵子是否受精时,低渗法更加快捷实用。

全文目录


中文摘要  7-9
Abstract  9-11
第一章 文献综述  11-21
  1.精子穿卵试验与受精生物学  11-12
  2.精子穿卵试验研究进展及现状  12-13
  3.精子穿卵试验与男性精液的实验室诊断技术  13-19
    3.1 精液概述  13
    3.2 精液分析的目的  13
    3.3 精液分析的主要内容及技术  13-19
      3.3.1 精液常规分析  13-16
      3.3.2 精子形态学分析  16
      3.3.3 精子功能指标分析  16-19
        3.3.3.1 精子活力的测定及其运动特征的分析  17
        3.3.3.2 精子-宫颈粘液相互作用测定  17-18
        3.3.3.3 精子顶体反应和顶体酶活力测定  18
        3.3.3.4 精子膜功能的测定  18
        3.3.3.5 精子核功能的测定  18-19
        3.3.3.6 精卵相互作用的测定  19
  4.精子穿卵试验当前需要解决的主要问题  19-20
    4.1 技术本身存在的问题  19
    4.2 技术的应用问题  19-20
  5.精子穿卵试验在临床实践中的应用  20-21
第二章 实验部分  21-35
  引言  21-22
  第一部分 材料与用具  22-25
    1.主要试剂  22-23
    2.主要仪器  23-24
    3.本试验涉及的主要溶液的配制  24-25
      3.1 用于穿卵试验BWW培养基的制备  24
      3.2 精子形态学分析用试剂的配制  24-25
      3.3 精子低渗功能渗透法检测试剂盒  25
      3.4 精子顶体酶活性定量检测试剂盒  25
    4.实验材料  25
      4.1 标本来源  25
      4.2 金黄地鼠规格及来源  25
  第二部分 实验方法与实验设计  25-29
    一.试验方法  25-28
      1.样本收集  25
      2.精液常规检测  25
      3.精液粘度和pH值检测  25
      4.精子头部表面膜完整性检测  25-26
      5.精子顶体酶活性定量检测  26
      6.Puresperm梯度离心法优化处理精液  26
      7.精子形态学检查  26-27
        7.1 染色方法  27
        7.2 精子形态评估  27
      8.穿卵试验  27-28
        8.1 人精子的准备  27
          8.1.1 精子收集  27
          8.1.2 精子获能  27
        8.2 去透明带金黄地鼠卵的准备  27-28
          8.2.1 动物的选择  27
          8.2.2 超数排卵  27
          8.2.3 卵子采集  27-28
          8.2.4 去除透明带  28
          8.2.5 精卵受精  28
          8.2.6 获取可能受精的卵子  28
        8.3 结果判断  28
    二.实验设计  28-29
      1.SPA操作中压片法和低渗法观察卵子是否受精的耗时和受精率比较  28
      2.精子密度和精子前向活动率对SPA值的影响  28
      3.精子头部表面膜完整性和精子顶体酶活性对SPA值的影响  28-29
      4.精子形态对SPA值的影响  29
      5.以SPA值为依据选择IUI的意义  29
  第三部分 实验结果与分析  29-31
    1.SPA操作中压片法和低渗法观察卵子是否受精的耗时和受精率比较  29
    2.精子密度和精子前向活动率与SPA值的关系  29-30
    3.精子头部表面膜完整性和精子顶体酶活性对SPA的影响  30
    4.精子形态对SPA的影响  30
    5.以SPA结果为依据选择IUI的意义  30-31
  第四部分 讨论  31-34
    1.SPA操作中压片法和低渗法观察卵子是否受精的耗时和受精率比较  31
    2.精子密度和精子前向活动率与SPA值的关系  31-32
    3.精子头部表面膜完整性对SPA值的影响  32
    4.精子顶体酶活性对SPA值的影响  32-33
    5.精子形态对SPA的影响  33
    6.以SPA结果为依据选择IUI的意义  33-34
  第五部分 结论  34-35
参考文献  35-40
附录  40-45
  附录一 实验图片  40-44
  附录二 缩略词表  44-45
致谢  45-46
发表文章  46

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体形态学 > 人体胚胎学（人体胎生学、发生学） > 人体胚胎学研究方法 > 实验人体胚胎学
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