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脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞血管紧张素转换酶2表达的影响

作　者: 王楠
导　师: 孙耕耘
学　校: 安徽医科大学
专　业: 急诊医学
关键词: 血管紧张素转换酶-2 脂多糖内皮细胞肺大鼠
分类号: R563.8
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

目的:研究血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme-2,ACE2)在大鼠肺微血管内皮细胞(rat pulmonary microvascular endothelial cell ,RPMVEC)上的表达,观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对RPMVEC的损伤作用及ACE2表达的影响。方法:采用RT-PCR、Western blot和免疫组化方法,检测体外培养的RPMVEC是否表达ACE2;引入内参半定量分析10μg/ml的LPS孵育RPMVEC后不同时相点ACE2表达的变化;用MTT比色法测定不同剂量LPS(0.1μg/ml-100μg/ml)作用后RPMVEC在540nm处的吸光度,以反映细胞存活率和代谢活性的变化。结果:1.体外成功分离培养出RPMVEC,并经形态学及FITC-BSI结合实验证实。2.RT-PCR法从细胞总RNA中扩增出ACE2的特异性条带,Western blot法在细胞蛋白提取液中检测出ACE2的蛋白印迹条带,免疫组化实验表明ACE2免疫组化反应产物主要位于RPMVEC的胞膜和胞浆。3.以10μg/ml的LPS处理RPMVEC后,用RT-PCR及Western blot法检测ACE2的变化,在3h、12h、24h时相点,ACE2 mRNA和蛋白的表达量均明显低于对照组。4.MTT比色实验表明,0.1μg/ml-100μg/ml浓度的LPS作用RPMVEC后,细胞存活率和代谢活性显著降低,并随着LPS浓度的增加而呈明显下降趋势。结论:1.成功进行了RPMVEC的体外培养,并鉴定为RPMVEC。2. RPMVEC可表达ACE2 mRNA和蛋白,其蛋白产物位于细胞的胞膜和胞浆。3.10μg/ml的LPS可下调RPMVEC中ACE2 mRNA和蛋白水平的表达。4. LPS可直接损伤RPMVEC,且LPS浓度与细胞损伤程度具有量效关系。

全文目录

英文缩略词表  5-7
中文摘要  7-8
英文摘要  8-10
前言  10-12
1. 材料与方法  12-25
  1.1 实验材料  12-13
  1.2 实验方法  13-25
  1.3 统计学处理  25
2. 实验结果  25-36
  2.1 RPMVEC 的分离、培养和鉴定  25-27
  2.2 不同浓度 LPS 对 RPMVEC 存活率和代谢活性的影响  27-29
  2.3 RPMVEC 上 ACE2 的表达及 LPS 作用后变化特征的检测  29-36
3. 讨论  36-42
  3.1 RPMVEC 的分离、培养和鉴定  36-37
  3.2 LPS 对体外培养 RPMVEC 存活率和代谢活性的影响  37-38
  3.3 ACE2 在 RPMVEC 的表达及 LPS 的影响  38-42
全文结论  42-43
参考文献  43-46
附录  46-47
致谢  47-48
综述  48-55

脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞血管紧张素转换酶2表达的影响

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