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刚果12号桉（Eucalyptus 12ABL）胚乳离体培养及植株再生的研究

作　者: 李守岭
导　师: 庄南生
学　校: 华南热带农业大学
专　业: 作物遗传育种
关键词: 刚果12号桉胚乳组织培养愈伤组织从生芽
分类号: S792.39
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

本研究以刚果12号桉授粉后的胚珠为外植体,进行胚乳愈伤组织的诱导及植株再生的研究,重点研究了胚乳培养的最佳时期、愈伤组织的诱导、不定芽的分化、增殖培养、芽苗生根、试管苗的移栽等有关问题。1.对刚果12号桉胚乳胚胎学的研究发现:用常规压片法对授粉后1～30d的胚乳进行胚胎学观察,结果表明授粉后1～7d是胚乳早期发育阶段;8～12d胚乳组织月牙形状开始生长;授粉13～16d胚乳生长比较旺盛,胚乳组织在短时间内迅速变大;授粉17～20d胚乳生长较慢;授粉21～24d胚乳组织开始退化,胚乳组织由大变小;授粉30d后已经观察不到胚乳组织。2.建立了胚乳植株的再生体系:确定了外植体的最佳取材时期及表面消毒方法;外植体经低温处理3d效果最好;诱导愈伤组织阶段表现最好的培养基是:MS+BA1.5mg/L+IAA1.0mg/L+蔗糖40g/L +琼脂粉7g/L,可以获得红色紧密型胚性愈伤组织;分化效果最好的培养基为MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖40g/L +琼脂粉7g/L;增殖最好的培养基为MS+BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L +蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L;生根效果最好的培养基为1/2MS +IBA 0.5mg/L +蔗糖30 g/L +琼脂粉7g/L。3.三倍体植株与二倍体植株相比,具有叶片肥厚宽大、茎较粗壮等特征;三倍体植株的叶片极显著宽于二倍体,长度差异不显著;三倍体植株的气孔长、宽均极显著大于二倍体;对形态学上鉴定为三倍体的植株作染色体计数,染色体数目均为2n=3x=33。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-8
1 文献综述  8-21
  1.1 桉树概况  8-9
  1.2 桉树组织培养研究进展  9-12
    1.2.1 桉树组织培养的重要意义  9
    1.2.2 桉树组织培养研究进展  9-12
      1.2.2.1 胚培养  10
      1.2.2.2 芽培养及嫩茎培养  10-11
      1.2.2.3 瘤培养  11
      1.2.2.4 根培养  11
      1.2.2.5 愈伤组织培养  11-12
      1.2.2.6 花药培养  12
  1.3 被子植物胚乳培养的现状与影响因素研究进展  12-20
    1.3.1 植物胚乳培养的现状  13
    1.3.2 由胚乳愈伤组织再生植株  13-15
      1.3.2.1 器官发生途径  13-14
      1.3.2.2 胚胎发生途径  14-15
    1.3.3 影响植物胚乳培养的主要因素  15-19
      1.3.3.1 基因型  15
      1.3.3.2 胚乳的发生类型和发育程度  15-16
      1.3.3.3 胚因子  16-17
      1.3.3.4 培养基成分  17-18
      1.3.3.5 低温  18-19
    1.3.4 存在问题及展望  19-20
  1.4 本论文的研究目的与意义  20
  1.5 技术路线  20-21
2 材料与方法  21-27
  2.1 试验材料  21
  2.2 试验设计及方法  21-27
    2.2.1 授粉后胚珠内胚乳发育过程的观察  21
    2.2.2 外植体的建立  21-22
      2.2.2.1 不同的消毒处理污染率、褐变率、愈伤组织诱导率的影响  21
      2.2.2.2 培养时期的选取  21-22
      2.2.2.3 低温处理对愈伤组织诱导率的影响  22
    2.2.3 愈伤组织诱导  22-23
      2.2.3.1 不同培养基配方对诱导愈伤组织的影响  22
      2.2.3.2 蔗糖浓度对诱导愈伤的影响  22
      2.2.3.3 椰乳对诱导愈伤的影响  22-23
      2.2.3.4 聚乙烯吡咯烷酮(PVP)对愈伤组织褐变的影响  23
      2.2.3.5 活性碳对诱导愈伤的影响  23
    2.2.4 离体再生体系的建立  23-24
      2.2.4.1 不定芽的诱导  23
      2.2.4.2 不定芽的继代增殖  23
      2.2.4.3 细胞分裂素对增殖培养的影响  23-24
      2.2.4.4 生长素对增殖培养的影响  24
      2.2.4.5 继代间隔对增殖培养的影响  24
      2.2.4.6 不同倍性组培苗的分离  24
    2.2.5 不同倍性试管苗生根培养  24-25
      2.2.5.1 无机盐浓度对植株生根的影响  24
      2.2.5.2 生根素浓度对植株生根的影响  24-25
    2.2.6 胚乳植株的鉴定  25-26
      2.2.6.1 形态学鉴定  25
      2.2.6.2 细胞学鉴定  25-26
    2.2.7 试管苗的移栽  26-27
3 结果与分析  27-43
  3.1 胚乳胚胎学的观察  27-28
    3.1.1 胚珠在果实内的分布位置与胚乳发育程度的关系  27
    3.1.2 授粉天数与胚乳发育程度的关系  27-28
  3.2 外植体离体培养及再生植株体系的建立  28-40
    3.2.1 不同的消毒处理对污染率、褐变率、愈伤组织诱导率的影响  28-29
    3.2.2 不同取材时期对愈伤组织诱导率的影响  29-30
    3.2.3 低温处理对愈伤组织诱导率的影响  30-31
    3.2.4 愈伤组织的诱导  31-35
      3.2.4.1 不同培养基配方对诱导愈伤组织的影响  31-33
      3.2.4.2 蔗糖浓度对诱导愈伤组织的影响  33
      3.2.4.3 椰乳对诱导愈伤的影响  33-34
      3.2.4.4 聚乙烯吡咯烷酮(PVP)对愈伤组织褐变的影响  34
      3.2.4.5 活性碳对诱导愈伤的影响  34-35
    3.2.5 不定芽的诱导  35-38
      3.2.5.1 细胞分裂素的影响  36
      3.2.5.2 生长素的影响  36-37
      3.2.5.3 继代间隔对增殖培养的影响  37-38
      3.2.5.4 不同倍性组培苗的分离  38
    3.2.6 不同倍性试管苗的生根培养  38-40
      3.2.6.1 无机盐浓度对植株生根的影响  38-39
      3.2.6.2 生长素浓度对植株生根的影响  39-40
  3.3 胚乳植株的鉴定  40-43
    3.3.1 形态学鉴定  40-42
    3.3.2 细胞学鉴定  42-43
4 讨论  43-47
  4.1 胚乳发育程度与形成愈伤组织的关系  43
  4.2 愈伤组织形态特征与不定芽的发生关系  43-44
  4.3 植物激素在分化培养中的作用  44-45
  4.4 胚因子的作用  45
  4.5 胚乳组织培养诱导三倍体植株的优势  45-46
  4.6 愈伤组织在丛生芽继代增殖中的变化  46
  4.7 胚乳培养过程中产生二倍体植株的可能原因  46-47
5 结论  47-48
6 参考文献  48-55
7 本文采用的缩写  55-56
8 附图  56-58
致谢  58

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