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人类yrdC基因靶向RNA干扰抑制胃癌生长的实验研究

作 者: 朱宏亮
导 师: 毕建威
学 校: 第二军医大学
专 业: 普通外科学
关键词: 人yrdC基因 RNA干扰 胃癌细胞
分类号: R735.2
类 型: 硕士论文
年 份: 2007年
下 载: 62次
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内容摘要


目的检测胃癌组织及癌旁正常组织中的yrdC的mRNA、蛋白表达,构建和鉴定yrdC靶向RNA干扰重组腺病毒,观察其对胃癌BGC-823细胞体外及体内生物学特性的影响。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法,检测7例胃癌组织及癌旁正常组织中的yrdC mRNA、蛋白表达。构建yrdC靶向RNA干扰重组腺病毒Ad-shyrdC,将其转染胃癌BGC-823细胞,应用Westen-blot检测yrdC蛋白表达变化,绘制细胞生长曲线,MTT比色法测定BGC-823细胞增殖的变化。裸鼠随机分为3组,背部皮下分别注射未转染的及Ad-Null和Ad-shyrdC转染的BGC-823细胞,30d后测量肿瘤体积及重量,HE染色及yrdC、FVIII因子、VEGF、PCNA、TUNEL免疫组化染色。结果胃癌组织中yrdC mRNA及蛋白表达量均比癌旁组织增高。成功构建了yrdC靶向RNA干扰重组腺病毒;转染BGC-823细胞后明显抑制其增殖活性,与未转染组及转染Ad-Null组均有显著差异( P< 0.05);接种裸鼠后30d后,RNA干扰组与对照组肿瘤体积及重量差异具有统计学意义(P<0.05),RNA干扰组肿瘤HE染色可见出现多处出血和片状坏死,免疫组化染色显示:RNA干扰组微血管密度明显少于对照组,VEGF、yrdC蛋白表达明显少于对照组,细胞凋亡增加,PCNA标记指数明显低于对照组。结论胃癌组织中蛋白水平及mRNA水平yrdC均呈高表达,yrdC基因靶向RNA干扰体外及体内有明显抑制胃癌细胞生长的作用,该基因可能成为胃癌基因治疗的一个靶点。

全文目录


中文摘要  4
英文摘要  4-6
英文缩略语  6-13
前言  13-16
第一部分:yrdC 在胃癌中的表达  16-29
  材料与方法  16-23
  结果  23-26
  讨论  26-28
  参考文献  28-29
第二部分:yrdC 靶向RNA 干扰腺病毒的构建  29-51
  材料  29-31
  方法  31-41
  结果  41-47
  讨论  47-49
  参考文献  49-51
第三部分:yrdC 靶向RNA 干扰对体外培养的BGC-823 细胞生物学特性的影响  51-60
  材料与方法  51-54
  结果  54-57
  讨论  57-58
  参考文献  58-60
第四部分:RNA 干扰yrdC 沉默影响BGC-823 细胞生物学特性的体内研究  60-72
  材料与方法  60-63
  结果  63-69
  讨论  69-71
  参考文献  71-72
全文总结  72-73
综述  73-79
  综述参考文献  77-79
致谢  79

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胃肿瘤
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