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广西山羊无浆体初步研究及PCR检测方法的建立

作　者: 莫宗成
导　师: 黄维义；张为宇
学　校: 广西大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 山羊绵羊无浆体 16SrRNA基因系统进化分析 PCR诊断方法流行病学
分类号: S858.27
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 31次
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内容摘要

本研究从广西都安自然感染的山羊体内分离得到一株无浆体，利用原核生物16SrRNA基因通用引物扩增其16SrRNA基因并将其与国内外已知的23株无浆体序列进行比较并绘制了进化树，发现该株无浆体与6株来自中国、美国和南非的绵羊无浆体位于同一分枝上，且与分离自美国的A．ovis Idaho株（AF318945）的同源性达到100％。研究结果首次从分子水平上证明了广西山羊感染了无浆体绵羊无浆体，并提示该株无浆体可能与美国的Idaho株为同一株绵羊无浆体，这一结果对研究我区无浆体病原的历史起源提供了参考，具有流行病学意义。为了建立特异、敏感、快速的无浆体诊断方法，给广西地区山羊无浆体病的流行病学调查提供有效的手段，本研究根据研究中已测得的绵羊无浆体及GenBank已收录的无浆体16SrRNA序列设计出一对特异性引物，建立了无浆体的PCR诊断方法。特异性实验和敏感性实验等表明，该诊断方法与巴贝斯虫、伊氏锥虫、巴尔通氏体、支原体、波氏杆菌、大肠杆菌等病原无交叉反应，能检测的血样DNA最低浓度为7.2×10¹⁰μg，同时能检测4℃保存半年或常温保存2个月的血样。通过临床血样检测，证明该方法是可以用于本病的早期感染或隐性感染的诊断。在对广西地区山羊无浆体病流行情况的初步调查中，采集了广西南宁、柳州、大化、都安的山羊临床血样共121份，同时应用本研究建立的PCR诊断方法和姬姆萨染色后光学显微镜检验两种方法对样品进行检验，以比较两种方法检测无浆体的准确性。结果用镜检的方法检测出阳性20份，用PCR的方法检测出阳性9份，低于镜检的阳性率，发现镜检时容易受条件或主观判定标准影响而产生假阳性或假阴性从而导致判定的结果的准确性降低。以PCR方法为标准，南宁和大化没有检验到阳性样品，柳州阳性率为6.3％，都安阳性率为20.6％，这一结果表明了山羊无浆体的感染在广西部分地区存在，而且有的地方感染情况较为严重，应进行深入广泛的调查并采取有效的防治措施。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
目录  8-9
文献综述  9-25
实验研究  25-56
  之一广西一株绵羊无浆体16srRNA基因序列克隆及分析  25-39
    1 材料与方法  25-30
    2 结果  30-34
    3 讨论  34-37
    4 参考文献  37-39
  之二无浆体特异PCR诊断方法的建立  39-49
    1 材料与方法  39-42
    2 结果  42-45
    3 讨论  45-48
    4 参考文献  48-49
  之三广西山羊无浆体病流行情况的初步调查  49-56
    1 材料与方法  49-51
    2 结果  51-52
    3 讨论  52-54
    4 参考文献  54-56
结论  56-57
致谢  57-58
个人简历  58-59
附录  59

广西山羊无浆体初步研究及PCR检测方法的建立

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