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人部分细胞株中neuritin表达检测及其过表达对细胞增殖、迁移的影响

作　者: 徐芬
导　师: 黄瑾
学　校: 石河子大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: neuritin 基因表达迁移分化
分类号: R346
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 44次
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内容摘要

目的:(1)检测neuritin在人类部分细胞株中的表达情况,筛选neuritin高表达和低表达细胞株;(2)探讨neuritin过表达对细胞增殖、迁移的影响。方法:(1)分别采用RT-PCR与免疫组织化学技术在mRNA水平及蛋白水平,检测本实验室现存11种人类正常和肿瘤细胞株中neuritin的表达情况;(2)扩增neuritin ORF,克隆至真核表达载体pcDNA3.1myc/his(-)A中,经转化、筛选、测序鉴定后,抽提并获取高纯度的重组质粒pcDNA3.1(-)A-neuritin,采用脂质体介导转染法将其转染neuritin低表达细胞株,RT-PCR及western-blot鉴定转染效果后,经G418筛选获得稳定表达neuritin的细胞;(3)通过MTT比色和细胞计数分析neuritin过表达对细胞增殖的影响,通过观察细胞形态变化和细胞迁移实验探讨neuritin过表达对细胞迁移的影响。结果:(1)通过RT-PCR和免疫组织化学检测,筛选出neuritin高表达细胞株293T、hUVEC、hUASMC、Soas-2、LOVO、L-02及低表达细胞株BMSCs、Hela、ECV-304、SK、QGY;(2)构建了neuritin的真核表达重组质粒pcDNA3.1(-)A-neuritin,经BamHⅠ+EcoRⅠ双酶切鉴定和测序鉴定证实neuritin基因已正确插入多克隆位点;(3)pcDNA3.1(-)A-neutitin转染人骨髓间充质干细胞(BMSCs)后,经G418筛选获得稳定表达neuritin的BMSCs;(4)镜下观察:neuritin过表达使BMSCs形态变得不规则,多伪足,且部分细胞伪足似丝状,更为细长;(5)MTT和细胞计数显示:neuritin过表达与BMSCs的数目呈负相关;(6)细胞迁移实验显示:neuritin过表达对BMSCs的迁移有促进作用。结论:(1)筛选出neuritin高表达及低表达细胞株,发现neuritin不仅在多种正常细胞中有表达,而且在部分肿瘤细胞中也有表达;(2)构建了pcDNA3.1(-)A-neutitin真核表达系统,并获得稳定表达neuritin的人骨髓间充质干细胞;(3)neuritin过表达与BMSCs的数目呈负相关,可能与细胞增殖无关;(4)neuritin过表达使BMSCs出现伪足的自主性生长,并能促进细胞的迁移;(5)neuritin过表达使部分BMSCs的形态出现类神经元样改变,可能与细胞的分化相关。

全文目录

中文摘要  6-7
英文摘要  7-8
英文缩略词表  8-9
前言  9-12
材料  12-19
  1 细胞  12
  2 菌株与质粒  12
  3 主要试剂  12-13
  4 主要试剂配置  13-17
  5 主要仪器设备  17-19
方法  19-31
  1 细胞培养  19-20
  2 RT-PCR 检测neuritin mRNA 的表达  20-21
  3 免疫组织化学检测neuritin 蛋白的表达  21-22
  4 pcDNA3.1(-)A-neuritin 重组质粒的构建  22-26
  5 pcDNA3.1(-)A-neu 在 BMSCs 中的表达及稳定表达细胞的筛选  26-31
结果  31-41
  1 十一株细胞株中neuritin m RNA 的 RT-PCR 检测结果  31-32
  2 十一株细胞中neuritin 蛋白的免疫组织化学检测结果  32-33
  3 pcDNA3.1(-)A-neuritin 重组质粒的构建  33-35
  4 pcDNA3.1(-)A-neu 在 BMSCs 中的表达及稳定表达细胞的筛选  35-37
  5 neuritin过表达对BMSCs增殖和迁移的影响  37-41
讨论  41-44
结论  44-45
参考文献  45-47
文献综述  47-52
作者简介  52-53
致谢  53-54
导师评阅表  54

人部分细胞株中neuritin表达检测及其过表达对细胞增殖、迁移的影响

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