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新疆地区葡萄酒相关酵母菌的生物多样性研究

作　者: 杨莹
导　师: 刘延琳
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 葡萄与葡萄酒学
关键词: 野生葡萄酒酵母分子鉴定分类多样性
分类号: TS261.11
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 293次
引　用: 6次
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内容摘要

葡萄酒野生酵母是指存在于葡萄园和葡萄酒产区自然环境中的本土酵母,在每个微环境的本土酵母具有一些独特的代谢特性,这些特性可以赋予当地葡萄酒特别的风味特征。因此,野生葡萄酒相关酵母菌的生物多样性及特性研究已成为目前国外的研究热点。新疆地区拥有典型的气候特征和独特的地理条件,是葡萄的最佳生长区之一,也是近年来新兴的葡萄酒产区。本研究旨在考察新疆葡萄酒产区野生葡萄酿酒酵母菌的种类、分布及特性,揭示新疆地区野生葡萄酒相关酵母种类多样性,建立新疆地区野生葡萄酒酵母的资源库,为以后优良酿酒特性野生酵母菌的筛选、育种提供资源和必要的研究基础。本研究中,在新疆玛纳斯产区和鄯善产区共采集野生酿酒酵母菌426株,通过细胞和菌落形态及生理生化特征试验、WL营养培养基聚类分析、代表性菌株的核糖体5.8S(包括ITS1和ITS2)基因序列的四种限制性内切酶(HaeⅢ、Hin6Ⅰ、HinfⅠ、AluⅠ)酶切片段多型性分析(RFLP)以及核糖体5.8S-ITS区序列的测定等方法和手段,对所采集的菌株进行较系统的分类鉴定。研究结果表明,在新疆玛纳斯地区分布的葡萄酒相关酵母菌种有Hanseniaspora uvarum(葡萄汁有孢汉逊酵母),Issatchenkia orientalis(东方伊萨酵母),Pichia kluyveri(克鲁维毕赤酵母),Rhodotorula graminis(禾本红酵母),Cryptococcus flavescens(浅黄隐球酵母),Saccharcomyces ceresive(酿酒酵母)。鄯善地区存在的菌种有Hanseniaspora uvarum(葡萄汁有孢汉逊酵母),Saccharcomyces ceresive(酿酒酵母),Pichia kluyveri(克鲁维毕赤酵母),Issatchenkia terricola(陆生伊萨酵母),Candida zemplinina(未定名)及Candida stellata(星形假丝酵母)。同时发现在新疆玛纳斯采集的菌株中,数量最多的酵母菌种是Hanseniaspora uvarum,占到分离总数的80.81%;Pichia kluyveri,占7.69%;Issatchenkia orientalis,占4.80%; Rhodotorula graminis,占2.4%;Cryptococcus flavescens,占2.4%;Saccharcomyces ceresive,占1.9%。在新疆鄯善采集的菌株中,占主导地位的菌种是Hanseniaspora uvarum为总数的88.09%,其次是Saccharcomyces ceresive,占5.5%;还有Pichia kluyveri,占2.75%;Issatchenkia terricola,占2.29%;Candida zemplinina及Candida stellata共占3.66%。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-9
第一章文献综述  9-21
  1.1 葡萄酒相关酵母概述  9-13
    1.1.1 葡萄酒相关酵母菌的发现  9
    1.1.2 葡萄酒相关酵母菌的种类与分类  9-12
    1.1.3 葡萄和葡萄汁中的酵母菌落及自然发酵时的变化  12-13
  1.2 酵母菌的分类鉴定及相关研究进展  13-19
    1.2.1 传统鉴定方法  13-14
    1.2.2 生物化学与分子生物学鉴定方法  14-19
  1.3 本研究的目的与意义  19-21
第二章材料与方法  21-27
  2.1 菌株的收集  21
    2.1.1 采样地点  21
    2.1.2 菌株分离  21
    2.1.3 菌株保藏  21
  2.2 试验材料的初步分类  21-22
  2.3 常规鉴定方法  22-26
    2.3.1 形态学鉴定  22-23
    2.3.2 生理生化鉴定  23-25
    2.3.3 试验用培养基配方  25-26
  2.4 rDNA 序列分析方法  26-27
    2.4.1 总 DNA 提取  26
    2.4.2 5.8S-ITS 区的 PCR 扩增  26
    2.4.3 限制性内切酶消化  26
    2.4.4 测序  26-27
第三章结果与分析  27-44
  3.1 试验材料的分离和采集  27-30
  3.2 利用 WL 营养琼脂对试验材料的初步分类结果  30-33
  3.3 试验材料的形态与生理生化特征  33-36
    3.3.1 试验菌株的繁殖与形态特征  33-34
    3.3.2 试验菌株的生理生化特征  34-36
  3.4 5.8S-ITS RFLP 结果分析  36-41
  3.5 5.8S-ITS RFLP 聚类分析  41-43
  3.6 5.8S-ITS 区序列分析  43-44
第四章讨论  44-47
  4.1 不同生态环境中野生葡萄酒酵母菌种的差异  44
  4.2 新种Candida zemplinina 发现及与Candida stellata 的差异  44-45
  4.3 葡萄浆果和自然发酵中野生葡萄酒酵母菌种群变化  45
  4.4 5.8S-ITS RFLP 限制性内切酶的选用  45-47
第五章结论  47-48
参考文献  48-56
致谢  56-57
作者简介  57
发表论文情况  57

新疆地区葡萄酒相关酵母菌的生物多样性研究

内容摘要

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