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CD40信号在树突状细胞迁徙活化和其诱导的CTL特异性抗肿瘤免疫中的作用

作　者: 戴俊
导　师: 张学光
学　校: 苏州大学
专　业: 免疫学
关键词: 树突状细胞(DC) 肿瘤免疫共刺激分子趋化因子及其受体 CD40 TNF-α CTL
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

树突状细胞(dendritic ceils，DC)是机体内最重要的一群专职性抗原递呈细胞(antigen presenting cells，APC)，也是机体免疫应答的有力启动者。近年来，随着DC的功能和生物学特性被不断认识，DC在肿瘤免疫、移植免疫和抗感染免疫等方面日益受到人们的重视。 DC的前体细胞来源于骨髓造血干细胞，前体细胞伴随血流到达外周组织，分化为未成熟DC。在肿瘤免疫应答中，未成熟DC摄取肿瘤抗原物质，加工、处理成小分子的多肽片段，再把这些片段与主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex，MHC)结合，表达在细胞表面。逐渐成熟的DC离开肿瘤抗原部位，进入淋巴组织，定居于淋巴结的T细胞区。在迁移的过程中，DC发生一系列的变化，逐渐失去摄取抗原的能力，上调表达共刺激分子和组成性趋化因子受体，分泌多种趋化因子及细胞因子。成熟DC在淋巴结与初始T细胞相互作用，表面的抗原肽-MHC分子复合物被T细胞表面受体(T cell antigen receptor，TCR)识别产生抗原特异性信号，同时DC表达的共刺激分子与T细胞表面的相应分子结合，为T细胞提供第二信号从而促进T细胞活化增值。此外，DC还分泌一些细胞因子，如IL-1、IL-6、IL-12等，使T细胞进一步活化、增殖发育为具有肿瘤特异性杀伤性的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes，CTL)。CTL通过分泌具有抗肿瘤作用的效应分子穿孔素和颗粒酶发挥作用，穿孔素单体在靶细胞膜上形成不同孔径的跨膜通道，使颗粒酶进入靶细胞，引起靶细胞凋亡，从而产生针对相应靶细胞的细胞免疫应答。 DC在体内迁徙活化，激发T细胞活化为CTL，发动抗肿瘤免疫应答是一系列复杂而精细的过程，涉及到多个因素的调控，包括协同刺激信号的刺激、趋化因子及其受体在DC不同周期的转变等。作为其中最强有效的激发信号之一，CD40信号激发能促进DC成熟，明显上调细胞表面其他共刺激分子的表达，为T细胞的活化提供所必需的第二信号，促进Dc产生几一2、IL一12和TNF一a、IFN邓等多种细胞因子，从而启动各类初始T细胞发生免疫应答。而CD40信号激发对于DC的迁徙能力，和由DC激发的活化CTL的迁徙及其抗肿瘤能力的影响尚未有系统确切的研究，如何理解上述各因素之间的相互作用和内在联系，如何将不同成熟阶段DC的迁徙特性，以及DC激发的活化CTL细胞的迁徙和抗肿瘤能力加以合理利用，对于设计更加有效的DC和CTL抗肿瘤疫苗应用于临床有着重要的意义。1.激发性CD40单抗SCn对树突状细胞迁徙能力影响的研究:本研究利用抗原负载后，联合CD40激发性单抗5Cll或TNF一a激发，促进外周血CD14+单核细胞来源的DC成熟活化;Real一T而e PCR和FACS检测在不同方法刺激和成熟阶段的DC趋化因子分泌、趋化因子受体的表达谱;Transwell微孔迁徙实验检测DC的迁徙能力。实验结果显示:(1)未成熟DC低表达共刺激分子和组成性趋化因子受体;抗原负载后DC上调表达共刺激分子和趋化因子受体的表达;联合SCll诱导成熟具有增强DC分泌组成性趋化因子SDF一la、ELC和IP一10的能力;高水平的趋化因子可以通过自分泌作用，适度下调成熟DC自身高表达的组成性趋化因子受体CXCR4、CCR7。 (2)未成熟DC对各趋化因子和肿瘤上清的迁徙能力强于各组成熟DC;抗原负载后24h的DC表现出对生理性低浓度趋化因子的迁徙特性，对肿瘤上清的迁徙能力明显下降;联合SCll诱导的成熟DC具有对高浓度趋化因子的迁徙倾向性，对肿瘤上清的迁徙能力强于其他组成熟DC，各组成熟DC的迁徙均具有一定的肿瘤特异性。以上结果提示:不同促成熟因素诱导和不同成熟阶段的DC具有各自独特的迁徙特性，综合应用DC的迁徙特性在肿瘤治疗中具有潜在的应用价值。2.激发性CD40单抗SCn对树突状细胞激发的活化CTL迁徙能力的影响:本研究采用FACS检测T细胞在活化过程中趋化因子受体的表达:Transwell微孔迁徙实验检测活化CTL向DC上清，肿瘤上清及趋化因子的迁徙能力。结果显示:(l)各组DC均能促使初始T细胞在活化发育成为CTL期间上调趋化因子受体CXCR3的表达，其中以CD40激发性单抗SCll诱导的成熟DC激发的活化CTL尤其明显，同时此组成熟DC通过分泌高浓度的相应配体IP一10，有效的趋化活化CTL向DC上清迁徙。(2)SCll诱导的成熟DC激发的活化CTL具有很强的向肿瘤上清的迁徙特子性，其迁徙具有肿瘤特异性，此组活化CTL穿越内皮细胞的能力亦强于其他各组活化CTL。以上结果提示:CD40激发性单抗SCll诱导的成熟DC可以有效的激活T细胞，促进T细胞上调表达CXCR3，增强CTL向趋化因子和肿瘤上清的迁徙和穿越血管内皮细胞的能力。3:激发性CD40单抗5Cll对DC激发的活化CTL体外抗肿瘤能力的影响:本研究采用ELISA试剂盒法检侧细胞培养体系上清中几一2、IFN一Y的分泌，溶血实验和DNTB十BLT显色法检侧活化CTL胞浆穿孔素和颗粒酶的释放，光镜观察和“‘Cr释放法检测各组活化C几的体外抗肿瘤能力。结果显示:(1) CD40激发性单抗SCll诱导的成熟DC具有很强的刺激T细胞增值活化的能力。(2) SCll诱导的成熟DC促进T细胞分泌IL一2和IFN斗，从而增强Dc激发活化的CTL抗肿瘤效应分子穿孔素和颗粒酶的释放。(3) SCll诱导的成熟DC?

全文目录

中英文缩写词  16-18
研究背景  18-31
论文正文  31-68
  第一部分  31-47
  第二部分  47-56
  第三部分  56-68
结束语  68-70
附录综述  70-80
研究生期间发表的文章  80-81
致谢  81

CD40信号在树突状细胞迁徙活化和其诱导的CTL特异性抗肿瘤免疫中的作用

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