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紫花苜蓿组织培养再生体系的研究

作　者: 葛军
导　师: 卢欣石；马晖玲
学　校: 北京林业大学
专　业: 森林培育
关键词: 紫花苜蓿 组织培养 再生体系 体细胞胚 显微观察 植物内源激素
分类号: S542.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
下　载: 418次
引　用: 9次
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内容摘要


紫花苜蓿是一种重要的饲料作物，也是优良的水土保持植物，其组培再生体系的建立，将为日后的转基因及其他生物技术的应用做好技术准备。本实验通过对外植体、培养基、诱导时间等因素进行筛选，得到一套完整的组培再生体系，并对培养过程中的愈伤组织及体细胞胚进行细胞学观察和激素含量分析。 本实验的研究结果表明：胚轴是外植体的最佳选择，诱导愈伤组织的培养基以SH为基本培养基，添加激素2，4-D 2.0 mg／L和KT0.025 mg／L，愈伤组织在诱导培养基上生长3周后，转入含有KT0.5～1.0 mg／L的分化培养基，在此培养基上处理5天后，愈伤组织开始产生胚状体。成熟胚出现后，将其转入无激素的培养基中发育成苗。在此体系中，胚轴的分化率达到74％。另外，实验中还发现在诱导培养基中添加蛋白胨2g／L可以提高体胚的产生率。再生出的无根苗转入生根培养基：1／2MS+IBA1.0mg／L+15g／L蔗糖，生根率可达90％以上。从接种外植体到成苗，整个再生周期为100天左右。 内源激素测定的结果显示，IAA是促进愈伤组织生长的重要因子。当体胚大量形成时，IPA与IAA比值及IPA的含量均较高，IAA、GA、ABA的含量较低，适当的ABA含量可能对体胚的发育成熟有促进作用。分化阶段单纯高浓度的KT能使IPA的含量迅速上升，而使IAA、GA、ABA的含量大幅下降，利于体胚的出现。 细胞学观察表明胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织在形态学和细胞学上均有很大差别，体细胞胚的发生经历了多细胞原胚、球形胚、心形胚、子叶胚、鱼雷胚等多个阶段，在胚性愈伤组织的内部和表面均有发生体细胞胚的可能性。

全文目录


独创性声明  3-4
摘要  4-5
ABSTRACT  5-8
引言  8-10
1 文献综述  10-17
  1.1 理论基础  10-12
    1.1.1 植物激素与体细胞胚的发生  11
    1.1.2 基因型的影响  11
    1.1.3 营养成分的影响  11-12
  1.2 国内外研究进展  12-16
    1.2.1 基本培养基的选择  12-13
    1.2.2 基因型的选择  13
    1.2.3 外植体的选择  13-14
    1.2.4 激素配比  14-15
    1.2.5 复合添加物的选择  15
    1.2.6 原生质体的培养及其他研究  15-16
  1.3 现存问题  16
  1.4 发展趋势  16-17
2 紫花苜蓿组织培养再生体系的建立  17-43
  2.1 试验材料与方法  17-21
    2.1.1 供试材料  17
    2.1.2 外植体的制备  17
    2.1.3 培养基及培养条件  17-19
    2.1.4 观察与统计方法  19-20
    2.1.5 实验步骤  20-21
  2.2 结果与分析  21-40
    2.2.1 诱导愈伤组织  21-30
    2.2.2 愈伤组织的分化  30-38
    2.2.3 生根培养基的选择和苗的移栽  38-40
  2.3 讨论  40-43
    2.3.1 不同外植体的选择对苜蓿植株再生的影响  40
    2.3.2 不同的外源生长调节物质对苜蓿植株再生的影响  40-41
    2.3.3 植物激素诱导时间与胚状体的形成  41
    2.3.4 不同品种紫花苜蓿植株再生能力的差异  41-43
3 紫花苜蓿愈伤组织及体细胞胚的细胞学观察  43-48
  3.1 材料与方法  43-44
    3.1.1 试验材料  43
    3.1.2 试验方法  43-44
  3.2 结果与分析  44-45
    3.2.1 不同配方对产生愈伤组织和体细胞胚的影响  44
    3.2.2 胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织的细胞学观察  44
    3.2.3 体细胞胚发生的各个阶段的细胞学观察  44-45
    3.2.4 愈伤组织产生不定根的细胞学观察  45
  3.3 讨论  45-48
    3.3.1 不同浓度生长素和细胞分裂素的组合对形成胚性愈伤组织的影响  45
    3.3.2 体细胞胚的起源  45
    3.3.3 胚性细胞与非胚性细胞的关系  45-48
4 紫花苜蓿愈伤组织中内源激素的分析  48-56
  4.1 试验材料与方法  48
    4.1.1 试验材料  48
    4.1.2 研究方法  48
  4.2 结果与分析  48-54
    4.2.1 愈伤组织产生体细胞胚前后植物内源激素含量的变化  48-50
    4.2.2 不同部位外植体愈伤组织内源激素含量的变化  50-51
    4.2.3 不同外源生长调节物质及其浓度对愈伤组织内源激素的影响  51-53
    4.2.4 不同品种愈伤组织内源激素含量的变化  53-54
  4.3 讨论  54-56
5 结论  56-58
参考文献  58-61
个人简介  61-62
导师简介  62-63
获得成果目录清单  63-64
致谢  64
附图  64-66

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中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 饲料作物、牧草 > 一年生豆科牧草 > 天蓝苜蓿
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