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优化安祖花规模化离体培养技术的研究

作　者: 蔡能
导　师: 易自力；蒋建雄
学　校: 湖南农业大学
专　业: 植物学
关键词: 安祖花 离体培养 试管苗 移栽 细菌性枯萎病
分类号: S682.14
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要


安祖花是我国近些年引进的一种名贵花卉植物，其花型奇特、花期持久、色彩丰富，深受人们青睐。但以传统的分株方法繁殖安祖花不仅繁殖速度慢、繁殖率极低，而且还受到季节的限制，这些因素极大地限制了安祖花的发展。为了解决这些问题，前人尝试了采用植物离体培养技术来快速繁殖安祖花，遗憾的是目前国内已报道的安祖花组培技术还未能达到工厂化培养的要求，特别是炼苗和移栽技术未能过关，另外，组培苗的病害也较为严重。本研究通过对离体培养中基本培养基、激素、糖类、pH值、光照、附加物、外植体等因素的探索，优化了安祖花快速繁殖体系，提高了愈伤诱导率和不定芽分化率；对安祖花进行移栽前药剂浸泡和炼苗处理，提高了移栽成活率，探讨了栽培过程中基质、光照等因素的影响，提高了种苗的生长速度和质量；对安祖花栽培中出现的细菌性枯萎病的病原菌进行了初步鉴定，运用链霉素抑制了病害的发生。其研究结果如下： 1 安祖花大规模离体培养快速繁殖技术的优化 在安祖花的愈伤组织诱导过程中发现，将BA与2.4-D配合使用比单独使用BA或2.4-D效果要好，诱导率分别提高8％和30％左右。适当降低基本培养基中N元素的浓度可以提高愈伤诱导率，当NH4NO3与KNO3降到250mg／L时，诱导率达到100％，比前人的研究提高15％左右。使用不同糖类，诱导率不同，使用30g／L蔗糖或葡萄糖诱导率均可达到100％，比使用麦芽糖高13％；而在愈伤质量上，用葡萄糖诱导的愈伤组织较大，质量较好。以无菌苗叶片、叶柄为外植体，不同品种诱导率均可达97％以上；而盆栽苗则以全展叶的叶柄和成熟叶的叶片为外植体最好。愈伤组织诱导培养基以改良MS+BA0.2（0.5，1.0）+2.4-D0.1+30g／L葡萄糖较好。 在愈伤组织分化不定芽时，使用较高浓度的BA与NAA，分化率可达到91.7％，而通过使用葡萄糖作为碳源，可使分化率提高到96.1％。分化培养基以改良MS+BA2.5+NAA0.5+30g／L葡萄糖较好，分化率高，分化芽较多。 以腋芽增殖途径繁殖试管苗，培养基以改良MS+B ALO王NAA 0.1较好，增殖倍数达6.6，芽较长、基部愈伤少: 在安祖花试管苗继代增殖过程中，基本培养基对继代产生影响，在试管苗鲜重的增长率上，改良MS与MS之间具有极显著差异。椰乳对生长具有促进作用，与不含椰乳的培养基之间差异显著。强光有利于试管苗的生长，光照强度为5500L况与2500Lx对试管苗鲜重增加率具有极显著差异。较适合的继代培养基为改良MS+BA（KT）2.。+NAAO.05+葡萄糖3。叭+椰汁100叭。在此继代培养基上，试管苗还能长出3一5条粗壮的根，可以不经生根直接进行移栽，简化了培养程序.2提高安祖花试管苗移栽成活率及生长速度的研究 在试管苗移栽前的处理中，多菌灵溶液浸泡处理比KNln04溶液处理效果要好，其中，多菌灵以0.2%处理20min较好，成活率达91 .1%，比KMno4溶液处理的要高12%。 揭膜炼苗对试管苗适应外界环境具有好处，揭膜5天成活率达到86%，揭膜7天以上，成活率达98%。移栽时带3条或3条以上的根对移栽苗生长时的株高、叶片数、根数均具有促进作用。 从株高、叶片数、根数方面综合考虑，移栽基质以椰子壳:泥炭土:珍珠岩为2:0.5:0.5为好。在株高、叶片数、叶面积、根数上，普通日光灯和植物生长灯之间没有显著差异。 护3新发现的安祖花细菌性枯萎病致病菌的初步鉴定与防治 从安祖花枯萎病病叶上分离和纯化，得到一株细菌，通过回接安祖花，发现此细菌为安祖花细菌性枯萎病的致病菌。此细菌为革兰氏阴性菌，通过BiologMicrostatinn细菌自动鉴定系统将此菌株鉴定为恶臭假单胞菌生物变种A（Pseudomonas put才da biovarA）。此菌对安祖花的危害未见有报道，因此，此菌为一种新发现的安祖花细菌性枯萎病的致病菌。 链霉素对此细菌的抑制作用比氯霉素要好，80mglL的链霉素即可完全抑制此细菌。通过用农用链霉素（1000万单位，149）配制成的0.15%的溶液进行试管苗移栽前的浸泡处理，最终成活率可以达到94.6%;对移栽苗进行灌根和叶面喷施，对病害的抑制具有较好的效果。

全文目录


第一章 文献综述  13-26
  1 安祖花离体培养研究进展及其存在的问题  13-16
    1.1 安祖花离体培养研究进展  13-15
      1.1.1 愈伤组织的诱导及分化  13-15
        1.1.1.1 愈伤组织的诱导  13-14
        1.1.1.2 愈伤组织的增殖及分化  14-15
      1.1.2 直接成苗  15
      1.1.3 继代增殖  15
      1.1.4 试管苗生根  15
    1.2 存在的问题  15-16
  2 安祖花试管苗的移栽及管理研究进展  16-19
    2.1 试管苗移栽前的处理  16
    2.2 基质的选择  16-17
    2.3 温度需求  17-18
    2.4 相对湿度的控制  18
    2.5 光照要求  18
    2.6 pH值要求  18
    2.7 营养要求  18-19
  3 安祖花病害及其防治研究进展  19-26
    3.1 真菌病害  19-21
      3.1.1 炭疽病  19
      3.1.2 根腐病  19-20
      3.1.3 茎基腐烂病  20-21
      3.1.4 褐斑病  21
      3.1.5 苗枯病  21
    3.2 细菌病害  21-24
      3.2.1 细菌性枯萎病  22-24
      3.2.2 伊尔瘟病  24
      3.2.3 安祖花萎凋病  24
      3.2.4 叶腐病  24
    3.3 病毒病  24-26
第二章 安祖花规模化离体培养快速繁殖技术的优化  26-40
  1 材料与方法  26-27
    1.1 材料  26
    1.2 培养基  26-27
    1.3 方法  27
    1.4 培养条件  27
  2 结果与分析  27-38
    2.1 从愈伤组织途径得到不定芽  27-33
      2.1.1 愈伤组织的诱导  27-31
        2.1.1.1 不同激素组合对愈伤诱导的影响  27-28
        2.1.1.2 基本培养基对愈伤诱导的影响  28
        2.1.1.3 激素浓度对愈伤诱导的影响  28-29
        2.1.1.4 糖类及浓度对愈伤诱导的影响  29-30
        2.1.1.5 光照条件对愈伤组织诱导的影响  30
        2.1.1.6 不同品种无菌苗愈伤组织的诱导  30
        2.1.1.7 不同发育阶段愈伤组织诱导差异比较  30-31
      2.1.2 愈伤组织的分化  31-33
        2.1.2.1 激素对愈伤组织分化不定芽的影响  31-32
        2.1.2.2 不同碳源对愈伤组织分化不定芽的影响  32-33
    2.2 通过腋芽增殖获得丛生芽  33
    2.3 试管苗的继代培养  33-38
      2.3.1 培养基类型对安祖花试管苗生长的影响  33-34
      2.3.2 pH值对安祖花试管苗生长的影响  34
      2.3.3 水解酪蛋白(CH)对安祖花试管苗生长的影响  34
      2.3.4 椰子汁对安祖花试管苗生长的影响  34-35
      2.3.5 BA、KT与NAA对安祖花生长的影响  35
      2.3.6 葡萄糖浓度和光照强度对安祖花试管苗生长的影响  35-38
  3 小结与讨论  38-40
第三章 提高安祖花试管苗移栽成活率及其生长速度的研究  40-50
  1 材料与方法  40-42
    1.1 材料  40
    1.2 方法  40-42
      1.2.1 基质的准备  40
      1.2.2 试管苗的移栽  40-42
        1.2.2.1 KMnO_4处理  41
        1.2.2.2 多菌灵处理  41
        1.2.2.3 揭膜炼苗处理  41
        1.2.2.4 不同带根条数试管苗的移栽  41
        1.2.2.5 不同基质栽培  41-42
        1.2.2.6 不同光源处理  42
  2 结果与分析  42-49
    2.1 KMnO_4不同浓度和不同时间处理对移栽成活率的影响  42
    2.2 多菌灵不同浓度与时间处理对移栽成活率的影响  42-43
    2.3 揭膜炼苗天数对移栽后成活率的影响  43-44
    2.4 移栽时带根条数对移栽试管苗生长的影响  44-46
    2.5 基质对安祖花生长的影响  46-47
    2.6 光照对安祖花生长的影响  47-49
  3 小结与讨论  49-50
第四章 安祖花枯萎病的病原菌鉴定及防治  50-58
  1 材料与方法  50-52
    1.1 病原菌的鉴定  50-51
      1.1.1 分离培养基  50
      1.1.2 分离纯化方法  50
      1.1.3 致病性测试  50-51
      1.1.4 菌种鉴定方法  51
        1.1.4.1 革兰氏染色  51
        1.1.4.2 生理鉴定  51
    1.2 抗生素抑菌实验  51
      1.2.1 抗生素溶液的配制  51
      1.2.2 菌液的培养  51
      1.2.3 抑菌实验  51
    1.3 病害的防治  51-52
      1.3.1 移栽前的处理  51-52
      1.3.2 移栽后处理  52
  2 结果与分析  52-56
    2.1 分离纯化结果  52
    2.2 致病性测试结果  52
    2.3 菌种鉴定结果  52-54
    2.4 抗生素抑菌结果  54
    2.5 病害防治  54-56
      2.5.1 移栽前处理对成活率的影响  54-55
      2.5.2 灌根和叶面喷药效果  55-56
  3 小结与讨论  56-58
参考文献  58-64
图版  64-67
致谢  67-68
作者简介  68

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中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 观赏园艺（花卉和观赏树木） > 多年生花卉类 > 宿根花卉类 > 安祖花
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