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肿瘤患者和体检人群血清p53抗体的ELISA检测研究

作　者: 潘鹏涛
导　师: 王丽
学　校: 东北师范大学
专　业: 细胞生物学
关键词: p53蛋白 p53抗体噬菌体展示技术 ELISA
分类号: R730.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 28次
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内容摘要

癌症是威胁人类健康的主要杀手,在我国每年癌症发病人数约260万,死亡约180万,成为我国城市和农村居民的首位死因。导致这一现象的原因很多,如肿瘤自身形成的复杂性等,但是其中一个重要的原因是目前人类还不能对肿瘤的发生发展过程进行有效的诊断,尤其是早期诊断。在当前没有找到好的攻克肿瘤的方法时,肿瘤的早期筛查显得格外重要。研究发现p53抗体具有广普性和特异性特点,能够作为肿瘤早期筛查的一个重要标志物。本研究利用基因工程手段,制备了人重组全长p53蛋白及展示p53蛋白DO7表位的杂合噬菌体蛋白,分别以全长p53蛋白、展示p53蛋白DO7表位的杂合噬菌体蛋白及两者混合包被作为抗原,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)对316例肿瘤患者和874例教职工进行血清p53抗体检测。结果如下:1)以全长p53蛋白包被作为抗原,肿瘤患者血清p53抗体检出率为20.3%。2)以展示p53蛋白DO7表位的杂合噬菌体蛋白包被作为抗原,肿瘤患者血清p53抗体检出率为18%。3)以两者混合包被作为抗原,肿瘤患者血清p53抗体检出率为25.9%。4)运用三套ELISA检测体系对874例体检者进行血清p53抗体筛查,共筛查到37例p53抗体阳性体检者,并在对他们进行进一步的跟踪、观察。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
第一部分引言  8-20
  一、p53 研究进展  8-16
    （一） p53 基因的结构及功能  8-9
    （二） p53 基因突变的检测方法  9
    （三） p53 蛋白的结构与功能  9-10
    （四） p53 抗体  10-16
  二、噬菌体展示技术  16-20
    （一）丝状噬菌体的结构和生物学特性  16
    （二） PⅢ展示系统  16
    （三） PⅧ展示系统  16-17
    （四）噬菌体展示的载体  17
    （五）噬菌体展示技术的应用  17-18
    （六）噬菌体抗体库技术的特点  18-20
第二部分实验材料与方法  20-28
  一、实验材料  20-21
    （一）质粒、细菌菌株  20
    （二）主要试剂  20-21
  二、试验方法  21-28
    （一）人野生型重组p53 蛋白的制备  21-22
    （二）人重组p53 蛋白抗原性鉴定  22-23
    （三）杂合噬菌体的制备及免疫原性鉴定  23-24
    （四）血清p53 抗体的 ELISA 检测  24-28
第三部分结果与分析  28-39
  一、重组人p53 表达、纯化与抗原性鉴定  28-31
    （一）重组人p53 蛋白的诱导表达  28-29
    （二）重组人p53 蛋白的镍柱纯化及浓缩  29
    （三）重组人p53 蛋白浓度的测定  29-30
    （四）重组人p53 蛋白抗原性鉴定  30-31
  二、杂合噬菌体的制备及抗原性鉴定  31-32
    （一）噬菌粒pfd88-D07 的验证  31
    （二）杂合噬菌体的制备与 SDS-PAGE 分析  31-32
    （三）杂合噬菌体蛋白 Western blot 分析  32
  三、血清p53 抗体的 ELISA 检测  32-39
    （一）间接 ELISA 检测p53 抗体体系的建立  32-35
    （二） cut-off 值的确立  35-36
    （三）肿瘤患者血清p53 抗体的检测  36-39
第四部分讨论  39-42
  一、检测p53 抗体的 ELISA 体系建立  39-40
  二、肿瘤患者血清p53 抗体的检测  40-41
  三、体检人群血清p53 抗体检测  41-42
结论  42-43
参考文献  43-49
致谢  49-50
在研期间公开发表论文情况  50
在研期间参加项目情况  50

肿瘤患者和体检人群血清p53抗体的ELISA检测研究

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