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血管内皮生长因子对血管内皮细胞αv整合素表达的影响

作　者: 姚阳
导　师: 范广宇
学　校: 中国医科大学
专　业: 骨科学
关键词: 血管内皮生长因子内皮细胞整合素
分类号: R641
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

目的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)促进创伤修复的作用主要是通过促进血管新生而实现的，即促进内皮细胞生芽，迁移，增殖与基质重塑。而整合素(尤其是αv整合素)做为一种细胞粘附分子，在细胞迁移，粘附以及增殖中发挥着重要作用。因此，明确血管内皮生长因子对整合素的影响是探索其促进血管新生和创伤修复机制的重要一步。在体内实验中，外源性VEGF能明显上调αv整合素的表达，并通过整合素来影响血管新生。在体外实验中，外源性VEGF作用于体外培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell，HUVEC)后，早期(4～5小时)即能明显促进由αv整合素组成的整合素分子(αvβ3，αvβ5)介导的内皮细胞迁移，但同时发现，外源性VEGF直接作用于体外培养的大血管内皮细胞后，早期(4～5小时)对αv整合素的表达没有明显影响，至于晚期(24小时后)对αv整合素的表达有何影响，尚未见明确报道。虽然外源性VEGF能在作用24小时后明显上调体外培养的微血管内皮细胞αv整合素的表达，但是，体外培养的血管内皮细胞分为大血管内皮细胞和微血管内皮细胞，两者的生物学行为不尽一致。因此，本实验将外源性VEGF直接作用于体外培养的大血管内皮细胞-人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，并检测24小时后αv整合素的表达，以明确和完善外源性VEGF对体外培养的大血管内皮细胞αv整合素表达的影响，探讨VEGF促进血管内皮细胞迁移及血管新生的机制。为进一步研究VEGF促进血管新生以及创伤修复的作用提供依据。方法 1．人脐静脉内皮细胞原代培养：取正常产新鲜胎儿脐带，PBS液冲洗后，用0.25％胰蛋白酶消化液灌注于脐静脉内，37℃下消化5分钟，用PBS液冲洗后离心，再用含20％胎牛血清的DMEM培养液制成细胞悬液。将细胞悬液接种于被覆明胶的24孔培养板上及盖玻片上，37℃，·5%CoZ条件下孵箱内孵育，当细胞呈亚融合状态时，用第植因子抗体鉴定培养的内皮细胞，待显微镜下检测显示细胞贴壁后，换成无血清培养液继续在37℃，5%CO:条件下孵育24小时，以达到使细胞饥饿的状态。 2.实验分组及施加实验因素:本实验分为两组，即对照组(无血清DMEM组);实验组(VEGF组);对照组培养孔内加人ld无血清DMEM培养液，实验组孔内加人1耐20n扩d VEGF(重组人VEGF165)，在37℃，5%COZ条件下孵育。连续做三批样本。分别用95%冰乙醇固定细胞后，放人4℃冰箱内保存。 3.检测av整合素:采用免疫细胞化学的方法(SP法)，以。整合素山羊I步多克隆抗体为一抗，兔抗山羊I步为二抗，遵照说明书分别对三批样本进行染色。 4.统计学方法:染色后分别对三批样本进行平均灰度值分析，灰度越低则阳性细胞率越高，采用SPSS分析，t检验。结果 av整合素阳性表达于内皮细胞膜上，对照组(DMEM组)HUVEC膜表面av整合素呈弱表达;实验组(VEGF组)细胞膜上可见棕褐色染色明显加深，因细胞膜立体包绕胞质和胞核，故染色颗粒覆盖了胞浆及胞核。实验组与对照组相比，平均灰度值差异有显著统计学意义(p<0.01)结论外源性vEGF在作用24小时后，能明显上调体外培养的人脐静脉内皮细胞av整合素的表达。

全文目录

一、中文摘要  3-5
二、英文摘要  5-7
三、英文缩略语  7-8
四、论文主体  8-15
  1 前言  8-9
  2 实验材料与方法  9-10
  3 实验结果(附表附图)  10-13
  4 讨论  13-14
  5 结论  14-15
五、本研究新见解  15-16
六、参考文献  16-17
七、致谢  17-18
八、综述  18-33
九、个人简介  33

血管内皮生长因子对血管内皮细胞αv整合素表达的影响

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