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清脑灵含药血清诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化成神经元样细胞

作　者: 王金良
导　师: 刘建国
学　校: 华中科技大学
专　业: 中西医结合
关键词: 清脑灵煎剂含药血清骨髓间充质干细胞神经元样细胞
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:观察含中药方剂清脑灵煎剂的SD大鼠血清在体外是否诱导大鼠的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells MSCs)成功的分化成神经元样细胞。方法:在无菌的条件下,分离出SD大鼠的股骨,去掉肌肉、骨膜及其两端的骺骨后,用2ml含20%胎牛血清的LG-DMEM冲出骨髓进入一无菌器皿中。吹打均匀后通过密度梯度离心法(Percoll液法)与全血贴壁培养法相互结合的方法来获取、分离、纯化大鼠骨髓间充质干细胞以获得纯净的大鼠骨髓间充质干细胞,通过在体外扩增、培养以便获得大量纯净的大鼠骨髓间充质干细胞。用流式细胞仪检测获取的大鼠骨髓间充质干细胞的表面抗原中性粒细胞粘附因子CD11b、淋巴细胞因子CD45表达与否来鉴定获取的大鼠骨髓间充质干细胞是否为真正的大鼠骨使髓间充质干细胞。用浓度为1mg/ml的含中药方剂清脑灵煎剂的SD大鼠血清诱导大鼠骨髓间充质干细胞,分别于5h、12h、1d、3d、7d在倒置显微镜下观看大鼠骨髓间充质干细胞的细胞形态变化,并用免疫细胞化学的方法检测被诱导的神经元样细胞巢蛋白(nestin)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达。结果:流式细胞仪检结果示:本实验获得的大鼠骨髓间充质干细胞不表达中性粒细胞粘附因子CD11b(1.76%)、淋巴细胞因子CD45(2.02%),证实所获取的大鼠骨髓间充质干细胞是真正的大鼠骨髓间充质干细胞。大鼠骨髓间充质干细胞被诱导后的神经元样细胞免疫细胞化学示:nestin阳性细胞、GFAP阴性细胞和NSE阳性细胞。结论:含中药方剂清脑灵煎剂的SD大鼠血清能够诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化成神经元样细胞。

全文目录

中文摘要  5-7
Abstract  7-9
前言  9-11
材料与方法  11-16
结果  16-20
讨论  20-39
附录  39-24
参考文献  24-25
综述  25-39
  参考文献  33-39
附录  39-40
致谢  40-41

清脑灵含药血清诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化成神经元样细胞

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