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纺锤体组装关卡基因hsMAD2在HCC中的表达及其对HepG2作用的研究

作　者: 李擒龙
导　师: 王文亮
学　校: 中国人民解放军第四军医大学
专　业: 病理学
关键词: 肝细胞肝癌 hsMAD2基因免疫组化基因转染细胞周期 Nocodazole
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
下　载: 22次
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内容摘要

hsMAD2(Human,mitotic arrest deficient-2)是监控有丝分裂时纺锤体行为的最重要的关卡(checkpoint)基因之一。目前认为以该基因为代表的这类基因可能控制着最初的癌变过程，因为MAD基因控制着的关卡(纺锤体组装关卡)的失效会导致染色体畸变和基因组的不稳定。人原发性肝细胞肝癌(human primary hepatocellular carcinoma,HCC)是消化系统常见的恶性肿瘤之一，流行病学及病因学的研究资料表明，肝细胞癌已经成为严重危害人类生命的主要疾病之一，其发病率在我国肝病患者中有明显增加趋势。但有关肝细胞癌的发病机制，目前仍未完全清楚。有关人原发性肝细胞肝癌与hsMAD2的相关性研究，尚未见报道。本研究的主要内容和结果如下： 1、采用免疫组化技术，在39例肝癌组织及15例癌旁肝组织、26例肝硬化组织和3例肝癌细胞系检测了hsMAD2的表达与分布情况。结果表明：hsMAD2在肝癌组织的表达率为58.97％(23／39)，而癌旁肝组织的阳性率为100％(15／15)；肝硬化为92.31％(24／26)，3例肝癌细胞系均未见表达。hsMAD2在肝癌中表达率与肝癌病理分级无关，而在癌组织与癌旁肝组织、肝硬化组织之间的差异具有显著性（P＜0．of）因此，hSMADZ在肝癌组织中的表达率相对于癌旁肝组织和肝硬化组织降低显著，提示该蛋白的表达可能与早期肝癌发生相关。 2、采用基因转染技术，将hSMADZ真核表达载体pCDNA3．lhsMADZ转入人肝癌细胞系HepGZ中，观察其对HepGZ细胞生长的影响。免疫细胞化学、Western Blot等方法证实hsMADZ己被成功地转入HepGZ细胞中。并通过观察细胞形态、测量生长曲线和分裂指数曲线，观察hSMADZ基因对HepGZ细胞生长和细胞增殖能力的影响。结果发现，稳定表达外源性hsMADZ蛋白的HCpGZ细胞（HepG－hsMADZ细胞）生长速度和细胞增殖能力并无显著性变化；流式细胞仪吓CM）检测结果 HepGZ上细胞周期GZ期、S期比例增加，而GI期细胞比例下降，但是差异无显著性。结果表明单纯表达外源性hsMADZ对细胞无明显影响。 3、Nocodazole 处理对细胞的影响：当经过纺锤体阻滞剂50nMnocodazole处理后，HCpGZ七细胞生长速度下降，差异具有显著性，细胞周期出现GZ期阻滞。相对地，HepGZ在受到Nocodazole处理后无明显变化。结果表明hsMADZ蛋白发挥了关卡作用，使受到Nocodazole破坏作用的细胞出现细胞周期的阻滞。本研究表明，hsMADZ在肝癌中的表达降低或缺失，在HepGZ呈缺失表达；单纯表达外源性k＊＊m对细胞无明显影响；＊p＊上MA＊2细胞经nocodazole处理后，GZ期阻滞显著，细胞生长受阻，hsMADZ发挥了关卡作用。对hsMADZ的进一步深入研究，有助于阐明HCC的发病机制，对开展肝癌的基因治疗也具有深远的意义。

全文目录

缩略词表  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-11
文献回顾  11-26
前言  26-27
实验部分  27-55
  材料与仪器设备  27-30
  方法  30-39
  结果  39-46
  讨论  46-54
  小结  54-55
致谢  55-56
参考文献  56-65
附图  65

纺锤体组装关卡基因hsMAD2在HCC中的表达及其对HepG2作用的研究

内容摘要

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