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食用菌中HIV-1反转录酶和蛋白酶抑制剂的分离与纯化

作　者: 罗倩怡
导　师: 王贺祥
学　校: 中国农业大学
专　业: 微生物学
关键词: 食用菌茯苓多糖复合物 HIV-1反转录酶 HIV-1蛋白酶
分类号: S646
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
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内容摘要

获得性免疫缺陷综合症(艾滋病)是一种因感染到人类免疫缺陷病毒(HIV)而导致的传染性疾病。人免疫缺陷病毒的反转录酶、蛋白酶和整合酶在病毒复制过程中起着十分重要的作用，缺一不可。目前较为有效的抗病毒化学治疗方法是反转录酶和蛋白酶抑制剂的复合用药，这些药物虽然能够对HIV有一定的抑制效果，但长期服用会对患者产生很大的毒副作用，且容易使病毒产生耐药性，所以需要寻找出毒性低且价格便宜的药物来对抗病毒。本论文测定了多种食用菌多糖复合物对反转录酶(RT)和蛋白酶(PR)的抑制作用。实验结果表明，对HIV-1 RT有抑制作用的组分主要集中在乙醇沉淀部分，即多糖复合物部分。其中以茯苓的活性最高，1mg／ml的反应浓度下抑制率达97.4％，其次是香栓菌90.6％和茶树菇84.5％。选取活性最高的茯苓菌丝体多糖复合物来作为纯化对象，经过DEAE-纤维素阴离子交换层析，CM-纤维素阳离子交换层析和FPLC Superdex 75凝胶过滤方法分离纯化后，获得一种对HIV-1 RT具有高抑制活性的糖蛋白S12，并测出其蛋白部分N末端的5个氨基酸顺序：丙氨酸—谷氨酸—天冬酰胺—甘氨酸—甘氨酸。在已测的22种食用菌多糖复合物对HIV-1 PR的抑制活性实验中，反应浓度为0.5mg／ml下对蛋白酶抑制活性最高的是香乳菇，其抑制率达80.9％。

全文目录

摘要  5-6
ABSTRACT  6-7
缩写  7-8
第一章文献综述  8-20
  1.1 人免疫缺陷病毒(HUMAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS, HIV)  8-13
    1.1.1 HIV的分类地位  8
    1.1.2 HIV病毒粒子的结构  8-9
    1.1.3 HIV基因组  9-10
    1.1.4 HIV的生活周期  10-12
    1.1.5 HIY-1复制中的3种关键酶  12-13
  1.2 抗HIV治疗及其疫苗的研究进展  13-15
    1.2.1 阻断病毒吸附和侵入  13-14
    1.2.2 病毒反转录酶和蛋白酶活性的抑制剂  14
    1.2.3 HIV疫苗  14-15
  1.3 食用菌的药用价值  15-17
    1.3.1 抗肿瘤作用  15-16
    1.3.2 抗病毒作用  16
    1.3.3 降血脂作用  16
    1.3.4 免疫调节作用  16-17
  1.4 生物大分子的分离与纯化  17-18
  1.5 本研究的目的和意义  18-20
第二章 HIV-1反转录酶抑制剂的分离与纯化  20-40
  2.1 材料  20-22
    2.1.1 供试菌种  20
    2.1.2 培养基和试剂  20-21
    2.1.3 实验仪器  21-22
  2.2 方法  22-26
    2.2.1 材料准备  22
    2.2.2 多糖复合物的制备  22-23
    2.2.3 反转录酶活性测定  23
    2.2.4 从茯苓水溶性多糖复合物中分离纯化HIV-1反转录酶的抑制剂  23-26
  2.3 结果与分析  26-35
    2.3.1 供试菌多糖复合物抑制HIV-1 RT活性的测定  26-28
    2.3.2 从茯苓水溶性多糖复合物中纯化HIV-1 RT的抑制剂  28-35
  2.4 讨论  35-40
    2.4.1 材料的选择  35-36
    2.4.2 HIV-1 RT抑制剂的纯化  36-38
    2.4.3 前景展望  38-40
第三章 HIV-1蛋白酶的提取与抑制剂的初步筛选  40-46
  3.1 材料  40-41
    3.1.1 菌种  40
    3.1.2 供试样品  40
    3.1.3 培养基和试剂  40-41
  3.2 方法  41-43
    3.2.1 重组HIV-1蛋白酶的表达  41-42
    3.2.2 重组HIV-1蛋白酶的提取和纯化  42
    3.2.3 重组HIV-1蛋白酶的复性  42-43
    3.2.4 重组HIV-1蛋白酶的活性测定  43
  3.3 结果与分析  43-44
    3.3.1 重组HIV-1蛋白酶活性检测  43-44
    3.3.2 食用菌水溶性多糖复合物对HIV-1 PR的抑制活性  44
  3.4 讨论  44-46
参考文献  46-51

食用菌中HIV-1反转录酶和蛋白酶抑制剂的分离与纯化

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