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CD40-CD40L在血管内皮细胞增殖过程中的作用

作　者: 延芳
导　师: 孙侃
学　校: 石河子大学
专　业: 内科学
关键词: 人脐静脉内皮细胞巨噬细胞一氧化氮细胞间粘附分子-1
分类号: R543.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

目的：1.探讨人脐静脉内皮细胞(HUVEC)及巨噬细胞的培养与鉴定方法；2.采用人脐静脉内皮细胞与能表达CD40L的巨噬细胞共同孵育,以及抗体阻滞试验的方法,探讨CD40-CD40L相互作用对内皮细胞释放NO及ICAM-1的影响,试图在细胞和分子水平上探讨动脉粥样硬化病理生理机制,为临床防治提供新的思路。方法：1.采用Ⅰ型胶原酶灌注法收集HUVEC,胰蛋白酶消化传代,Ⅷ因子免。疫组化染色鉴定内皮细胞；2.通过密度梯度离心法从健康成人外周血获得单核细胞,并衍化为巨噬细胞,吞噬试验及CD68免疫组化染色鉴定；3.取第三代HUVEC,观察与巨噬细胞共同孵育,以及采用抗CD40L单克隆抗体阻断CD40L作用后HUVECs的功能变化：(1)倒置显微镜观察细胞形态；(2)MTT法检测细胞存活率；(3)双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定ICAM-1；(4)硝酸还原酶法测血浆NO。结果：1.胶原酶灌注消化法收集细胞,胰蛋白酶消化传代可获得满意的HUVEC,Ⅷ因子染色证实培养细胞为内皮细胞；2.密度梯度离心法能够从人外周血中获取高纯度和活性的巨噬细胞,吞噬试验及CD68染色证实为巨噬细胞；3.与巨噬细胞共孵育组细胞形态发生改变,24小时与48小时细胞存活率明显低于对照组与抗CD40L组(P<0.05)且与巨噬细胞共孵育组存活率48小时细胞低于24小时(P<0.05)。4.与巨噬细胞共孵育组在24小时、48小时ICAM-1浓度显著高于对照组与抗CD40-L组(P<0.05),且48小时浓度高于24小时(P<0.05)。5.与巨噬细胞共孵育组在24小时、48小时NO浓度显著低于对照组与抗CD40-L组(P<0.05),且48小时浓度低于24小时(P<0.05)。结论：1胶原酶灌注消化法收集细胞,胰蛋白酶消化传代可获得满意的HUVECⅧ因子染色证实培养细胞为内皮细胞；2密度梯度离心法能够从人外周血中获取高纯度和活性的巨噬细胞,吞噬试验及CD68染色证实为巨噬细胞；3CD40-CD40L信号途径能够促进HUVECs释放ICAM-1,但对NO却起到抑制作用。4阻断CD40-CD401信号系统可能可以延缓血管病变的发生发展。

全文目录

摘要  6-7
Abstract  7-8
中英文对照表  8-9
前言  9-11
材料与方法  11-20
  1.材料  11-14
  2  14-16
  3.HUVEC与巨噬细胞膜共孵育  16-17
  4.实验分组:  17
  5.倒置显微镜下观察三组细胞的形态变化  17
  6.MTT法检测细胞增殖情况  17
  7.ICAM-1的测定  17-18
  8.NO的测定  18-19
  9.统计学处理  19-20
结果  20-31
讨论  31-36
  1.脐静脉内皮细胞的培养  31
  2.巨噬细胞的培养  31-32
  3.CD40-CD40L与血管内皮细胞  32-33
  4.CD40-CD40L与ICAM-1、血管内皮细胞  33-34
  5.CD40-CD40L与NO、血管内皮细胞  34-36
结论  36-37
参考文献  37-39
综述一  39-45
  参考文献  43-45
综述二  45-54
  参考文献  51-54
作者简历  54-55
致谢  55-56
导师评阅表  56

CD40-CD40L在血管内皮细胞增殖过程中的作用

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