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紫花苜蓿BADH基因导入与耐盐变异系的生理鉴定

作　者: 王珺
导　师: 柳小妮
学　校: 甘肃农业大学
专　业: 草业科学
关键词: 紫花苜蓿耐盐生理生化指标 BADH基因
分类号: S541.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

以耐高温高湿的“维多利亚”、“盛世”和“CW787”3个紫花苜蓿(Medicago sativa L.)品种的高频再生体系筛选所得耐盐株系和正常愈伤生长所得植株为材料,在0%、0.2%、0.4%、0.6%、0.8%和1.0% NaCl溶液胁迫下,通过丙二醛(MDA)、脯氨酸(PRO)、可溶性蛋白(SP)和可溶性糖含量(SS),以及超氧化物歧化酶(SOD)活性等生理生化指标的定量分析及综合评价,对耐盐变异系的耐盐性进行了鉴定。并利用农杆菌介导法转化BADH(甜菜碱醛脱氢酶)基因,建立一套农杆菌介导苜蓿基因转化的优化体系。研究选育出的抗盐碱苜蓿品系,可为盐碱地开发提供植物种质资料。主要结果如下:1)苜蓿耐盐突变体材料的丙二醛、脯氨酸、可溶性蛋白和可溶性糖含量,以及SOD活性均显著(p<0.05)或极显著(p<0.01)高于未经筛选的对照植株。2)随NaCl溶液浓度升高,耐盐变异系苜蓿材料的脯氨酸和可溶性蛋白含量均呈增加变化,丙二醛(MDA)含量均呈先降后升变化;可溶性糖含量和SOD活性则均呈先升后降变化,变化曲线中多以0.8%的盐浓度为转折点。3)耐盐变异系苜蓿品种耐盐性综合指数为:“盛世”>“CW787”>“维多利亚”。4)以培养7d的甘农4号和盛世紫花苜蓿的无菌苗下胚轴为外植体,农杆菌菌株为介体,得到优化苜蓿基因转化体系。当头孢霉素为200mg/L时,对农杆菌的抑菌效果较好;Kan筛选浓度为:盛世40mg/L、甘农4号50mg/L。采用下胚轴为试验对象;菌液OD600在0.3-0.5下,侵染时间10min;经筛选,获得10株抗Kan的甘农4号转化植株,其中1株经PCR检测呈阳性。由此说明BADH基因在转化植株中得到了良好表达。

全文目录

中文摘要  3-4
ABSTRACT  4-7
第一章绪论  7-23
  1 前言  7
  2 文献综述  7-21
    2.1 植物盐害及抗盐机理  7-12
    2.2 提高植物抗盐性策略  12-13
    2.3 植物耐盐基因工程与BADH 研究  13-18
    2.4 植物耐盐变异体离体筛选研究进展  18-21
  3 研究目的和意义  21-23
第二章紫花苜蓿耐盐突变体耐盐性评价  23-39
  1 材料与方法  23-27
    1.1 材料  23
    1.2 试验方法  23-27
  2 结果与分析  27-35
    2.1 紫花苜蓿生理生化特性  27-35
      2.1.1 丙二醛（MDA）含量  27-28
      2.1.2 脯氨酸含量  28-30
      2.1.3 可溶性糖含量  30-31
      2.1.4 可溶性蛋白含量  31-33
      2.1.5 超氧化物歧化酶（SOD）活性  33-35
    2.2 耐盐性综合评价  35
  3 讨论  35-39
    3.1 丙二醛含量  35-36
    3.2 脯氨酸含量  36-37
    3.3 可溶性糖及可溶性蛋白含量  37
    3.4 超氧化物歧化酶（SOD）活性  37-38
    3.5 综合评价  38-39
第三章农杆菌介导的紫花苜蓿BADH 基因转化体系的建立  39-53
  1 材料和方法  39-45
    1.1 材料  39-40
    1.2 试验方法  40-45
    1.3 数据分析  45
  2 结果与分析  45-50
    2.1 选择培养中抗菌素种类及其浓度确定  45-46
    2.2 选择培养基中卡那选择压得确定  46-47
    2.3 转化体系优化  47-49
    2.4 PCR 检测  49-50
  3 讨论  50-53
    3.1 抗生素的选择  50
    3.2 卡那霉素选择压  50-51
    3.3 浸染时间和菌液浓度对转化率的影响  51
    3.4 不同受体对转化的影响  51-52
    3.5 PCR 检测  52-53
第四章结论与建议  53-55
  1 结论  53-54
    1.1 紫花苜蓿耐盐变异系的生理鉴定  53-54
    1.2 紫花苜蓿BADH 基因导入  54
  2 展望  54-55
参考文献  55-62
致谢  62-63
个人简介  63-64
导师简介  64-66
附图  66-67

紫花苜蓿BADH基因导入与耐盐变异系的生理鉴定

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