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速生型刺槐AhDREB1基因遗传转化的研究

作　者: 沈俊岭
导　师: 李云
学　校: 北京林业大学
专　业: 林木遗传育种
关键词: 速生型刺槐再生系统 AhDREB1基因遗传转化 PCR检测
分类号: S792.27
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

刺槐（Robinia pseudoacacia L．）是我国主要的造林树种之一，其材质、抗逆性、生物质产量等均具有独特的优势，通过基因工程手段进一步提高其耐盐能力，对于提高我国盐渍地的利用率具有重要的现实意义。植物耐盐基因工程和刺槐基因工程的研究成果为本研究奠定了坚实基础，使本研究的成功具备了可能性。本研究以刺槐的优良无性系——速生型刺槐为材料，以其不含腋芽的茎段为外植体，研究了茎段再生和遗传转化过程中诸多影响因素的不同组合，建立并优化了速生型刺槐高频再生系统和遗传转化体系，并将AhDREB1基因导入到速生型刺槐中；主要研究内容及结果如下：1．利用L₉（3⁴）正交设计，研究了6-BA、KT、NAA、IBA、蔗糖和苗龄等因素对速生型刺槐茎段再生、节段扩繁和组培苗生根的影响，建立了茎段外植体高效再生体系。通过试验确定了速生型刺槐茎段再生的最佳培养基为：MS+6-BA 1.5mg·L^-1+NAA 0.75mg·L^-1+KT 1.5mg·L^-1；组培苗节段增殖的最佳培养基为：MS+6-BA 0.10mg·L^-1+NAA 0.02mg·L^-1；最佳生根培养基为：3／4MS+IBA 0.2mg·L^-1+NAA 0.2mg·L^-1+糖20g·L^-1。2．不同苗龄的茎段再生能力存在差异，继代20d的茎段再生效果最好。3．通过Km浓度梯度试验，研究了Km对速生型刺槐茎段再生和组培苗增殖的影响；Km对茎段再生和组培苗的分化均有强烈的抑制作用，30mg·L^-1即可抑制茎段的再生和非转化苗的生长，因此确定Km在遗传转化中适宜的选择压为30mg·L^-1。4、Cef对农杆菌抑制效果的研究结果表明：当Cef浓度达到150mg·L^-1时，菌液的OD₆₀₀值接近于0，说明此浓度已能够抑制农杆菌的生长，而且此浓度没有对刺槐茎段再生和组培苗分化产生明显的副作用；因此，150mg·L^-1是Cef作为抑菌剂的适宜浓度。5．通过预培养时间、菌液类型和共培养时间的L₉（3⁴）正交试验，对影响农杆菌转化效率的主要因素进行了研究，试验结果表明：预培养2d，菌液二次活化后加入10mg·L^-1的AS，摇匀后用于侵染遗传转化率较高，侵染最佳时间为21min，侵染后共培养2d可获得较好的转化效果，选择压由低到高进行梯度选择可使转化率提高。6．运用PCR对抗性株系进行了分子检测，结果显示，目的基因AhDREB1已整合到速生型刺槐基因组中，并得到了两个抗性株系。

速生型刺槐AhDREB1基因遗传转化的研究

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