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三种胡枝子组织培养的研究

作　者: 陈佳
导　师: 陈晓阳
学　校: 北京林业大学
专　业: 林木遗传育种
关键词: 胡枝子 组织培养
分类号: S793.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要


胡枝子（Lespedeza）属于豆科植物，是一种多年生落叶灌木。胡枝子适应性、抗逆性强，是优良的水土保持树种，还具有很高的经济利用价值。目前胡枝子的研究现状大多集中在常规育种，对于其遗传改良工程研究还未见报道。本论文主要是研究二色胡枝子、短梗胡枝子和截叶胡枝子三种胡枝子的组织培养，从而为胡枝子遗传改良工作奠定基础。 试验以胡枝子种子作为外植体，分别采用升汞和次氯酸钠灭菌，不同种和种源之间的污染率和发芽率存在差异。两种不同种源的二色胡枝子子叶节段的最佳分化培养基有所不同，但6-BA浓度大约在0.2～0.5mg/L，生长素浓度差异较大，而各水平间的差异未达到显著水平；短梗胡枝子的6-BA浓度的最佳浓度在0.5mg/L～1.0mg/L，且与0.2mg/L达到显著差异，NAA和2，4-D的最佳浓度均为0.01mg/L，浓度间差异未达到显著水平；截叶胡枝子的6-BA最佳浓度在1.0～2.0mg/L之间，且与8.0mg/L的差异达到显著水平，NAA最佳浓度为0.01mg/L，与0.5mg/L差异显著，2，4-D为0，浓度间差异未达到显著水平。取子叶节分化的茎段做继代培养，去顶茎段与带顶茎段之间有所差异，平山地区的二色胡枝子去顶茎段继代培养最佳浓度为6-BA浓度为1.0mg/L，带顶茎段则为2.0mg/L，NAA浓度均为0.01mg/L；美国乔治亚二色胡枝子去顶茎段无需NAA，带顶茎段则为0.01mg/L，6-BA浓度均以1.0mg/L为宜；短梗胡枝子带顶茎段最佳6-BA浓度为1.0mg/L，2，4-D为0.05mg/L；截叶胡枝子去顶茎段最佳6-BA最佳浓度为2.0mg/L，带顶茎段则为5.0mg/L，生长素浓度间差异较大。将继代得到的茎段进行壮苗培养，美国二色胡枝子6-BA浓度为0.1mg/L，NAA或2，4-D为0.01mg/L；短梗胡枝子6-BA浓度为0.2mg/L，2，4-D浓度为0.02mg/L。胡枝子生根培养的激素以选用IBA为佳，二色胡枝子IBA最适浓度为0.1mg/L-1.5mg/L，短梗胡枝子为0.5mg/L，而截叶胡枝子为0.5～1.0mg/L。 胡枝子诱导愈伤产生相对容易，胚轴、胚根、子叶片、叶片等器官诱导愈伤，以胚轴诱导愈伤较容易，且愈伤量较多，在诱导愈伤的同时有些器官能同时诱导出根，但没有分化芽现象，将愈伤转入分化芽培养基中培养也未见分化，有待于进一步研究。 在三种胡枝子组织培养过程中，截叶胡枝子生长出现了较为严重的褐化和黄化现象。当MS大量元素减半，降低6-BA浓度，减少琼脂浓度均能显著降低褐化率，缩短生长周期也能减弱褐化，如添加褐化抑制剂，以添加活性炭最佳，当浓度为1.0g/L不仅有效降低褐化率，而且更有利于茎段苗的生长。当MS大量元素中MgSO4．7H2O为300mg/L，NH4NO3为1600mg/L，以及铁盐浓度为3倍时，能极显著的降低黄化率，而Ca2+的浓度、糖的种类和浓度以及光的种类，这些处理对黄化现象无显著作用。

全文目录


摘要  3-4
ABSTRACT  4-9
1 引言  9-22
  1.1 组织培养技术在林木繁育中的作用  9-11
    1.1.1 快速繁殖大量种苗  9-10
      1.1.1.1 器官发生方式  9
      1.1.1.2 丛生芽增殖方式  9
      1.1.1.3 体细胞胚胎发生方式  9-10
    1.1.2 林木品种改良及良种繁育  10-11
      1.1.2.1 通过单倍体育种方法能获得纯系的新品种  10
      1.1.2.2 胚珠离体培养  10
      1.1.2.3 林木体细胞杂交研究  10
      1.1.2.4 林木的遗传转化的研究  10-11
      1.1.2.5 细胞突变体的筛选  11
    1.1.3 种质资源的保存  11
    1.1.4 次生代谢物的生产  11
  1.2 植物组织培养存在的几个局限性问题的研究进展  11-16
    1.2.1 褐化机理的研究  12-15
      1.2.1.1 褐化的界定及褐化现象研究的意义  12
      1.2.1.2 褐化发生机理  12
      1.2.1.3 褐化的相关影响因素  12-14
      1.2.1.4 降低褐化程度的方法  14-15
    1.2.2 黄化机理的研究  15-16
  1.3 豆科植物组织培养研究现状及技术要点  16-20
    1.3.1 体细胞胚胎发生的途径  16-18
    1.3.2 器官组织发生途径  18-20
      1.3.2.1 基因型和外植体种类  18-19
      1.3.2.2 培养基成分  19
      1.3.2.3 温度和光照  19-20
  1.4 胡枝子种质资源及其研究现状  20-22
    1.4.1 胡枝子概况  20-21
      1.4.1.1 生物学特征  20
      1.4.1.2 开发利用价值  20-21
    1.4.2 胡枝子研究现状及组织培养的意义  21-22
2 试验材料及方法  22-30
  2.1 试验材料  22
  2.2 本试验所用的药品及试剂  22
  2.3 试验方法  22-29
    2.3.1 二色胡枝子组织培养  22-24
      2.3.1.1 无菌体系的建立  22
      2.3.1.2 带子叶去顶茎段芽的诱导(初代培养)  22-23
      2.3.1.3 茎段芽的增殖培养(继代培养)  23-24
      2.3.1.4 壮苗培养  24
      2.3.1.5 茎段的生根培养  24
    2.3.2 短梗胡枝子组织培养  24-25
      2.3.2.1 无菌体系的建立  24
      2.3.2.2 带子叶去顶茎段芽的诱导(初代培养)  24-25
      2.3.2.3 茎段芽的增殖培养(继代培养)  25
      2.3.2.4 茎段的壮苗培养  25
      2.3.2.5 茎段的生根培养  25
    2.3.3 截叶胡枝子组织培养  25-27
      2.3.3.1 无菌体系的建立  25
      2.3.3.2 带子叶去顶茎段芽的诱导(初代培养)  25-26
      2.3.3.3 茎段芽的增殖培养(继代培养)  26-27
      2.3.3.4 茎段的生根培养  27
    2.3.4 愈伤组织的诱导与分化  27-28
      2.3.4.1 平山二色愈伤组织的诱导与分化  27
      2.3.4.2 美国二色愈伤组织的诱导与分化  27
      2.3.4.3 海城短梗愈伤组织的诱导与分化  27-28
      2.3.4.4 美国截叶愈伤组织的诱导与分化  28
    2.3.5 降低褐化率的试验  28
    2.3.6 降低黄化率的试验  28-29
  2.4 培养条件  29-30
3 结果与分析  30-54
  3.1 二色胡枝子组织培养  30-36
    3.1.1 无菌体系建立  30
    3.1.2 初代培养  30-31
    3.1.3 继代培养  31-34
      3.1.3.1 平山二色继代培养  31-32
      3.1.3.2 美国二色继代培养  32-34
    3.1.4 壮苗培养  34
    3.1.5 生根培养  34-36
      3.1.5.1 平山二色生根培养  34-35
      3.1.5.2 美国二色生根培养  35-36
  3.2 短梗胡枝子组织培养  36-39
    3.2.1 无菌体系建立  36
    3.2.2 初代培养  36-37
    3.2.3 继代培养  37-38
    3.2.4 壮苗培养  38-39
    3.2.5 生根培养  39
  3.3 截叶胡枝子组织培养  39-45
    3.3.1 无菌体系建立  39
    3.3.2 初代培养  39-42
    3.3.3 继代培养  42-44
      3.3.3.1 去顶茎段继代培养  42-43
      3.3.3.2 带顶茎段继代培养  43-44
    3.3.4 生根培养  44-45
  3.4 愈伤组织诱导与分化  45-47
    3.4.1 平山二色胡枝子愈伤组织诱导与分化  45-46
    3.4.2 美国二色胡枝子愈伤组织诱导与分化  46
    3.4.3 海城短梗胡枝子愈伤组织诱导与分化  46-47
    3.4.4 美国截叶胡枝子愈伤组织诱导与分化  47
  3.5 降低褐化率的试验  47-50
    3.5.1 大量元素、6-BA、糖和琼脂对褐化的影响  47-49
    3.5.2 添加抗氧化剂对褐化现象的抑制作用  49-50
  3.6 降低黄化率试验  50-54
    3.6.1 Mg~(2+)浓度对分化系数及黄化的影响  50-51
    3.6.2 N浓度对分化系数及黄化的影响  51-52
    3.6.3 铁盐浓度对分化系数及黄化的影响  52-53
    3.6.4 Ca~(2+)，糖及光对分化系数及黄化的影响  53-54
4 结论  54-55
5 讨论  55-57
参考文献  57-62
导师简介  62-64
个人简介  64-65
致谢  65-66
图版  66-68

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中图分类: > 农业科学 > 林业 > 森林树种 > 阔叶灌木 > 其他
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