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万寿菊雄性不育RAPD分子标记的研究

作　者: 沈一岚
导　师: 续九如
学　校: 北京林业大学
专　业: 林木遗传育种
关键词: 万寿菊随机扩增多态性(RAPD) 雄性不育特异标记
分类号: S682.11
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 205次
引　用: 3次
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内容摘要

万寿菊是现代园林中广泛应用的草本花卉,也是极具利用价值的经济植物。本研究找到了快速提取万寿菊雄性不育系、可育系、保持系和杂种F1代DNA的方法,采用了3次正交试验设计建立了RAPD反应扩增体系。然后,运用该扩增体系在五组随机引物中筛选出了引物OPA18进行万寿菊种子纯度的鉴定,得到了与田间检测接近的种子纯度结果。最后,选择万寿菊核不育两用系AALY001为材料,对雄性不育株和可育株进行扩增,得到了一条在不育株中缺失,在可育株中出现的稳定的特异标记NMSOPM09500。因此,用RAPD分子标记技术能够较有效地进行万寿菊种子纯度的鉴定,并且也能够为雄性不育万寿菊不育基因的研究提供一定的技术支持。

全文目录

摘要  3-4
ABSTRACT  4-8
1 引言  8-18
  1.1 万寿菊的研究进展  8-11
    1.1.1 万寿菊常规育种工作的研究进展  8-9
    1.1.2 万寿菊的组织培养研究进展  9-10
    1.1.3 万寿菊提取物的研究进展  10-11
      1.1.3.1 万寿菊花提取物的研究  10
      1.1.3.2 万寿菊根提取物的研究  10-11
  1.2 观赏花卉的雄性不育分子机制的研究进展  11-13
    1.2.1 金鱼草  11
    1.2.2 矮牵牛  11-12
    1.2.3 百合  12-13
    1.2.4 非洲菊  13
  1.3 分子标记技术种类及其发展状况  13-15
    1.3.1 DNA 分子标记的种类  13
    1.3.2 分子标记技术的发展状况  13-15
  1.4 展望  15-16
  1.5 本论文研究目的、创新点及技术路线  16-18
    1.5.1 研究目的  16
    1.5.2 创新点  16-17
    1.5.3 技术路线  17-18
2 万寿菊RAPD 分子标记体系的建立与优化  18-25
  2.1 材料与试剂  18
    2.1.1 材料与设备  18
    2.1.2 药品试剂  18
  2.2 研究方法  18-20
    2.2.1 植物材料准备  18
    2.2.2 总 DNA 的提取  18-19
    2.2.3 RAPD 扩增与电泳  19
    2.2.4 万寿菊 RAPD 反应条件优化  19-20
    2.2.5 退火温度和预变性时间试验  20
      2.2.5.1 退火温度  20
      2.2.5.2 预变性时间  20
  2.3 结果与分析  20-22
    2.3.1 DNA 提取结果检测  20-21
      2.3.1.1 DNA 浓度的紫外检测  20
      2.3.1.2 DNA 凝胶电泳检测  20-21
    2.3.2 RAPD 扩增体系优化结果  21-22
      2.3.2.1 正交试验设计Ⅰ的结果  21
      2.3.2.2 正交试验设计Ⅱ的结果  21
      2.3.2.3 正交试验设计Ⅲ的结果  21-22
    2.3.3 退火温度和预变性时间的结果  22
  2.4 讨论  22-25
    2.4.1 DNA 提取  22-23
    2.4.2 RAPD 扩增体系建立的试验设计思路  23
    2.4.3 PCR 反应程序对扩增效果的影响  23-24
    2.4.4 PCR 反应混合物对扩增效果的影响  24-25
3 万寿菊种子纯度的 RAPD 鉴定  25-35
  3.1 材料与方法  25
    3.1.1 试验材料  25
    3.1.2 试验试剂和仪器  25
    3.1.3 试验方法  25
  3.2 结果与分析  25-32
    3.2.1 单株DNA 提取凝胶电泳结果  25-26
    3.2.2 不育系、保持系与杂交子代混合株 DNA 扩增结果  26-30
      3.2.2.1 不育系、保持系及子代扩增凝胶电泳结果  26-28
      3.2.2.2 不育系、保持系及子代扩增谱带统计  28-30
    3.2.3 引物筛选  30-31
    3.2.4 种子资源鉴定  31-32
      3.2.4.1 商品制种的万寿菊单株RAPD 扩增电泳结果  31-32
      3.2.4.2 商品种子单株DNA 种子纯度检测  32
  3.3 讨论  32-35
    3.3.1 应用RAPD 进行种子鉴定的优势  32-33
    3.3.2 万寿菊种子鉴定中出现的问题  33
    3.3.3 杂种鉴定技术的改进  33-35
4 万寿菊雄性不育系不育基因的RAPD 鉴定  35-44
  4.1 材料与方法  35-37
    4.1.1 试验材料  35-36
    4.1.2 试验试剂及仪器  36
    4.1.3 试验方法  36-37
      4.1.3.1 RAPD 扩增雄性不育系和可育系  36
      4.1.3.2 雄性不育系特异扩增片段的回收  36-37
  4.2 结果与分析  37-43
    4.2.1 雄性不育系DNA 提取结果  37
    4.2.2 雄性不育系RAPD 扩增结果  37-42
      4.2.2.1 雄性不育系的电泳图谱结果  37-39
      4.2.2.2 不育系、保持系及子代扩增谱带统计  39-42
    4.2.3 扩增特异片段的引物筛选  42-43
  4.3 讨论  43-44
5 结论  44-45
参考文献  45-51
导师简介  51-52
作者简介  52-53
致谢  53-54
博硕士论文同意发表的声明  54

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