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仔猪人工感染囊尾蚴后体液免疫和细胞免疫变化规律的研究

作　者: 徐鹏
导　师: 赵权
学　校: 吉林农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 猪囊尾蚴 ELISA 体液免疫细胞免疫流式细胞术
分类号: S858.28
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

猪囊尾蚴病是危害最为严重的人畜共患寄生虫病之一，其病原是复杂的真核生物，有猪带绦虫、六钩蚴、囊尾蚴等多个发育阶段，在人与猪之间循环感染寄生发育。目前国内外已在病原和宿主个体、细胞和分子水平上对猪囊尾蚴入侵与免疫、免疫与免疫逃避以及免疫预防等方面进行了大量的研究，初步明确了虫体的组成成分与结构形态以及发育形式与病原入侵和免疫的关系，为免疫预防控制，特别是分子免疫预防奠定了坚实的基础，但要完全控制和消灭该病，还有很长的路要走。试验一采用SephadexG-200层析技术纯化猪囊尾蚴（Cysticercus cellulosae）囊液粗抗原，共获得两种（CF₁、CF₂）层析抗原。以酶联免疫吸附试验（ELISA）判定抗原的最适包被浓度以及抗体的最适稀释倍数，各阶段最适反应条件，结果证明CF₁具有特异性强、敏感性高、稳定性好、重复性强的特点，可以作为免疫诊断囊尾蚴病猪的IgG，并在原有的ELISA诊断方法基础上，进一步优化了实验室条件下检测猪囊尾蚴的各项指标，使其检测结果更加敏感、特异，同时为猪囊尾蚴病的流行病学调查提供借鉴和参考。试验二目的：探讨仔猪人工感染猪囊尾蚴后不同时间间隔外周血中血清抗体的消长规律。方法：将10头试验猪随机分为两组，即攻虫组和对照组，每组5头，间接ELISA法检测攻虫后5天、10天、15天、20天、25天、30天、35天、40天、50天、60天、70天、80天试验猪外周血血清中的抗体。结果：仔猪人工感染猪囊尾蚴后，最早血清抗体ELISA检测呈可疑状态（即OD 0.35，低于临界值0.36）是在感染后第10天（1／5）；15天时，有2头猪血清抗体ELISA检测呈阳性（2／5）；20天时，5头猪血清抗体ELISA检测结果均呈阳性。40天时抗体水平达到高峰，然后随着感染日龄的增加，抗体水平有所下降，但仍维持较高水平，呈波动性曲线变化。试验三目的：探讨仔猪人工感染猪囊尾蚴后外周血中CD₃⁺、CD₄⁺、CD₈⁺T淋巴细胞的变化规律。方法：将10头仔猪随机分为两组，即攻虫组和对照组，每组5头，用流式细胞仪检测攻虫后10天、20天、30天、40天、70天试验猪外周血中T淋巴细胞亚群的变化情况。结果：整个检测过程中CD₃⁺T细胞百分比一直处于较低水平。在感染初期CD₄⁺T细胞和CD₈⁺T细胞百分比明显降低，且CD₄⁺T细胞百分比明显高于CD₈⁺T细胞；感染中期CD₈⁺T细胞百分比有所增加，但仍以CD₄⁺T细胞百分比占优势；感染后期CD₄⁺T细胞和CD₈⁺T细胞百分比都有所恢复。仔猪人工感染囊尾蚴后，感染初

全文目录

前言  11-15
  1 猪囊尾蚴病的流行病学  11-14
    1.1 流行因素  12-13
    1.2 猪囊尾蚴病的分布  13
    1.3 猪囊尾蚴病的危害  13-14
  2 本课题研究的目的和意义  14-15
第一篇文献综述  15-30
  第一章囊虫病免疫诊断检测方法的研究进展  15-21
    1 囊虫病免疫诊断检测方法的研究进展  15-18
      1.1 免疫学检测方法  15-18
    2 基因检测技术  18-19
      2.1 DIG标记DNA探针  18
      2.2 细胞因子基因检测方法  18
      2.3 基因重组技术  18-19
    3 免疫试剂盒的应用  19-21
      3.1 循环抗原酶联免疫试剂盒  19
      3.2 胶体金免疫层析(ICT)试剂盒  19
      3.3 猪囊虫短程抗体IgG_4快速ELISA检测试剂盒  19-20
      3.4 金标诊断试剂盒  20-21
  第二章猪囊尾蚴病病原入侵与免疫机制研究进展  21-30
    1 病原入侵致病作用及免疫逃避机制  21-24
      1.1 病原入侵与致病机制  21-22
      1.2 病原感染时的机体免疫反应  22-24
    2 囊尾蚴免疫抑制及免疫逃避机制的研究进展  24-28
      2.1 传统免疫抑制机理  24-25
      2.2 功能性蛋白酶类的作用机制  25-26
      2.3 蛋白酶抑制剂作用机制  26-28
      2.4 易化免疫(facilitateimmune)逃避机制  28
    3 研究猪囊尾蚴逃避机制的意义和今后的方向  28-30
第二篇研究内容  30-53
  试验一猪囊尾蚴囊液抗原制备及ELISA检测条件的优化  30-41
    1 材料与方法  30-33
      1.1 材料  30-31
      1.2 方法  31-33
    2 结果与分析  33-38
      2.1 ELISA各步反应条件确定结果  33-37
      2.2 ELISA阳性临界值的确定  37-38
      2.3 优化猪囊尾蚴病ELISA检测方法的检测步骤  38
      2.4 优化ELISA方法的敏感性、特异性、重复性试验结果  38
    3 结论  38-39
    4 讨论  39-41
      4.1 凝胶层析  39
      4.2 ELISA试验条件的优化  39-41
  试验二仔猪人工感染囊尾蚴后血清抗体消长规律的研究  41-46
    1 材料与方法  42-43
      1.1 材料  42
      1.2 方法  42-43
    2 结果  43-44
    3 讨论  44-46
  试验三仔猪人工感染囊尾蚴后淋巴细胞亚群的动态变化研究  46-53
    1 材料与方法  46-47
      1.1 材料  46-47
      1.2 方法  47
      1.3 流式细胞仪分析  47
    2 结果  47-50
      2.1 仔猪人工感染囊尾蚴后外周血中CD_3~+细胞比例变化  47-48
      2.2 仔猪人工感染囊尾蚴后外周血中CD_4~+细胞比例变化  48-49
      2.3 仔猪人工感染囊尾蚴后外周血中CD_8~+细胞比例变化  49-50
    3 讨论  50-53
结论  53-54
参考文献  54-61
附录  61-62
致谢  62

仔猪人工感染囊尾蚴后体液免疫和细胞免疫变化规律的研究

内容摘要

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