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中国4株伯氏疏螺旋体5s-23srRNA基因间隔区的克隆、序列分析和外膜蛋白A的克隆及表达

作　者: 曾霞
导　师: 王树声
学　校: 广西医科大学
专　业: 医学微生物学
关键词: 莱姆病伯氏疏螺旋体 5s-23srRNA（rrf-rrl）基因间隔区外膜蛋白A PCR扩增克隆序列分析基因种基因表达
分类号: R346
类　型: 硕士论文
年　份: 2002年
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内容摘要

目的：对广西、贵州的4株伯氏疏螺旋体分离株进行基因种鉴定，进而克隆其外膜蛋白A（OSPA），测序分析其变异情况，体外表达OSPA基因，获取OSPA蛋白，为制备诊断试剂和疫苗研究作基础准备。方法：利用5s-23srRNA（rrf-rrl）基因间隔区引物进行PCR扩增，其产物插入质粒pGEM-T Easy中，构建重组质粒，经测序并与国外分离株进行同源性比较，鉴定4株伯氏疏螺旋体（GXLD-4、9、18和长14）的基因型。应用PCR技术、分子克隆、原核表达等方法从4株伯氏疏螺旋体全细胞DNA组中扩增得到OSPA基因，分别克隆到质粒pGEM-T Easy上，对阳性克隆进行测序和序列分析，与国外分离株进行同源性比较，并用限制性内切酶NdeI和XhoI从重组质粒pGEM-T Easy-OSPA上将OSPA基因切下，分别克隆到表达载体pET3oa中，在大肠杆菌BL₂1中进行表达。结果：GXLD-4、9、18及长14株（贵州）均可扩增出242bp的5s-23srRNA间隔区基因，同源性达99％以上。与Borrelia valaisiana基因种的同源性均比其他基因种高，核苷酸同源性为97.1～97.9％。4株伯氏疏螺旋体所扩增出的OSPA基因均为774bP，编码258个氨基酸，4株间核苷酸同源性98.7～99.8％，氨基酸同源性98～99％，与国外分离株10MT株、Ya501株的同源性较好。OSPA基因在大肠杆菌中高效表达，分子量为 3 IKD。结论：4株伯氏疏螺旋体均属于 Borrelia valaisiana基因种，具有相同的OSPA血清型，与 10MT株和 Ya501株属同一 OSPA血清型，此结果为国内首次报告。重组OSPA在大肠杆菌上的成功表达为制备莱姆病诊断试剂和疫苗研究奠定了基础。

中国4株伯氏疏螺旋体5s-23srRNA基因间隔区的克隆、序列分析和外膜蛋白A的克隆及表达

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