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鸡NDV野毒株部分生物学特性研究及不同来源NDV间抗原同源性比较

作　者: 邱玉玉
导　师: 崔治中
学　校: 山东农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 鸡新城疫病毒 F基因血凝试验及血凝抑制试验抗原同源性比较
分类号: S852.65
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

鸡新城疫(ND)是鸡的一种急性、高度接触性、烈性、病毒性传染病,对养禽业危害极大,被国际兽医局(OIE)列为对动物危害最大的A类传染病之一,每年给国家造成上百亿元的经济损失。近年来,在新城疫Lasota疫苗免疫鸡群及高抗体鸡群中不断有新城疫的发生。据报道,原因不仅与免疫方法、途径、疫苗等有关,更重要的是与新城疫的毒株的变异,不同的基因型的出现有关。我国现行的疫苗株为I系、II系(B1)、III系(F)、IV系(Lasota)和V4株等,均属于经典型(基因I型、II型)。而流行毒株则属于基因VI、VII、VIII、IX,且每一次流行都有新的基因型或亚型出现,给目前仅有少数几种疫苗来防制ND的可能性提出了质疑。本研究主要是通过PCR技术、血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HI)等方法对NDV进行分离鉴定及生物学特性研究,并对分离到的一株NDV LY-CX油乳苗的免疫保护性做了研究,通过血凝抑制试验(HI)和细胞上的病毒中和实验(VI)来对不同基因型的NDV做了抗原同源性性比较,进一步阐明了为什么在疫苗的免疫保护作用下禽类仍能够感染NDV。表明了新城疫流行的毒株基因型的变化及其与常规疫苗LaSota和我国所存标准强毒Y98F9之间的抗原性的差异。本课题分为以下三个部分进行研究。1.鸡新城疫病毒中国野毒株的分离鉴定及部分生物学特性研究从来自某鸡场送检的疑似新城疫症状的六只病鸡中,通过SPF鸡胚培养,常规的病毒分离培养、血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HI)以及提取

全文目录

一.英文缩略表  9-10
二.中文摘要  10-13
三.英文摘要  13-16
四.前言  16-32
试验一新城疫病毒野毒株的分离.鉴定及部分生物学特性的研究  32-43
  1 材料与方法  32-37
    1.1 材料  32-33
      1.1.1 病料  32
      1.1.2 生物制品及来源  32
      1.1.3 实验鸡  32
      1.1.4 缓冲液  32
      1.1.5 主要试剂及培养基  32-33
      1.1.6 主要仪器设备  33
    1.2 方法  33-37
      1.2.1 病料采取及处理  33-34
      1.2.2 细菌的分离  34
      1.2.3 病毒的分离  34
        1.2.3.1 鸡胚接种  34
        1.2.3.2 细胞培养  34
      1.2.4 分离株生物学特性的鉴定  34-35
        1.2.4.1 HA及HI实验  34
        1.2.4.2 病毒组织培养半数感染量(TCID50)的滴定  34-35
        1.2.4.3 空斑试验  35
      1.2.5 分离株毒力的测定  35-36
        1.2.5.1 最小致死量致死鸡胚的平均时间(MDT)的测定  35
        1.2.5.2 1 日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)测定  35-36
        1.2.5.3 6 周龄小鸡翅静脉接种指数(IVPI)测定  36
      1.2.6 RT-PCR 鉴定  36-37
        1.2.6.1 引物设计  36
        1.2.6.2 病毒的大量培养与纯化  36
        1.2.6.3 病毒RNA的提取  36-37
        1.2.6.4 RT-PCR 反应  37
        1.2.6.5 PCR 反应  37
      1.2.7 动物回归试验  37
  2 结果与分析  37-41
    2.1 病毒的分离  37
    2.2 细胞培养  37-38
    2.3 分离株生物学活性的鉴定  38
      2.3.1 HA 及HI 测定  38
      2.3.2 TCID50 的测定  38
      2.3.3 空斑实验  38
    2.4 分离株毒力的测定  38-40
      2.4.1 LY-CX 株MDT 测定  38
      2.4.2 LY-CX 株ICPI 的测定  38-39
      2.4.3 LY-CX 株IVPI 的测定  39-40
    2.5 RT-PCR  40
    2.6 动物回归试验  40-41
  3 讨论  41-43
试验二不同来源新城疫病毒间的抗原同源性比较  43-51
  1 材料与方法  43-45
    1.1 材料  43-44
      1.1.1 种毒  43
      1.1.2 试验动物  43
      1.1.3 新城疫油乳苗  43-44
      1.1.4 抗不同毒株NDV 的免疫血清  44
    1.2 方法  44-45
      1.2.1 抗体HI 试验测定  44
      1.2.2 病毒中和试验  44-45
        1.2.2.1 种毒TCID_(50) 的测定  44
        1.2.2.2 血清灭能  44-45
        1.2.2.3 感作  45
        1.2.2.4 对照  45
        1.2.2.5 接种  45
        1.2.2.6 观察和结果判定  45
  2. 结果与分析  45-49
    2.1 毒株的TCID_(50)  45-46
    2.2 不同毒株及其抗血清间HI 交叉反应中的同源性比较  46-47
    2.3 不同毒株及其抗血清间病毒中和反应中的同源性比较  47-49
  3 讨论  49-51
试验三 NDV LY-CX 株油乳苗免疫保护试验研究  51-57
  1 材料与方法  51-53
    1.1 材料  51
      1.1.1 试验用NDV病毒  51
      1.1.2 试验用疫苗  51
      1.1.3 试验用鸡  51
      1.1.4 其他试验用品  51
    1.2 方法  51-53
      1.2.1 试验用鸡分组.免疫及攻毒  51-52
      1.2.2 定期采血  52
      1.2.3 血清NDV的HI抗体测定  52
      1.2.4 数据处理  52
      1.2.5 临床观察和死淘记录  52-53
  2 结果与分析  53-55
    2.1 城疫病毒免疫血清HI 结果（㏒2）  53-54
    2.2 LY-CX NDV 油乳苗免疫保护实验  54
    2.3 试验鸡群的临床观察和死淘记录  54-55
  3 讨论  55-57
六.结论  57-58
七.参考文献  58-70
八.附图  70-73
九.致谢  73-74
九.攻读学位期间发表论文  74

鸡NDV野毒株部分生物学特性研究及不同来源NDV间抗原同源性比较

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