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蛋白折叠液相色谱法中包涵体的碱溶法

作　者: 刘家华
导　师: 王超展；耿信笃
学　校: 西北大学
专　业: 分析化学
关键词: 蛋白折叠液相色谱法 重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF) 重组人干细胞因子(rhSCF) 包涵体溶解 质量回收率
分类号: O657.72
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 72次
引　用: 3次
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内容摘要


本文包括五个章节。首先,用稀碱溶液对重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）包涵体进行了溶解,并对条件进行了优化;然后用蛋白折叠液相色谱法（PFLC）,包括阴离子交换色谱、金属离子亲和色谱和疏水色谱对rhG-CSF进行复性,提高了rhG-CSF在不同色谱模式下的质量回收率。还用碱性溶液液对重组人干细胞因子（rhG-CSF）包涵体进行了溶解,并用强阴离子交换色谱法对其进行纯化及复性。 1.重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）包涵体碱液溶解优化 系统研究了rhG-CSF包涵体的溶解条件,包括pH值、脲浓度、氢氧化钠浓度、溶解时间等,确定用含2.0mol·L-1Urea、100mmol·L-1Tirs的0.10mol·L-1NaOH溶液作为rhG-CSF包涵体的溶解剂。对用碱溶液作为rhG-CSF包涵体的溶解剂与用8.0mol·L-1脲溶解包涵体的效果进行了比较,结果显示用碱液抽提可以获得纯度和浓度较高的抽提液。用丙酮沉淀蛋白对rhG-CSF脲溶抽提液进行再次纯化,纯化后碱液抽提液的纯度可以显著提高。 2.蛋白折叠液相色谱法（PFLC）复性重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF） 用PFLC纯化及同时复性rhG-CSF可得到如下的结果:（1）用弱阴离子交换WAX对碱溶的rhG-CSF分离纯化及复性,一步纯化的纯度可以得到89.9%,比活性为6.3x107IU·mg-1,质量回收率为73.0%。（2）先采用排阻色谱柱（Superdex 30）对rhG-CSF进行初纯化后用简易弱阴离子交换柱最终可以得到纯度96.5%,比活性为8.4×107IU·mg-1的目标组分,质量回收率可以达到71.5%。（3）用SAX对碱溶的rhG-CSF分离纯化及复性,纯化后一步rhG-CSF纯度达到97.8%,比

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中图分类: > 数理科学和化学 > 化学 > 分析化学 > 仪器分析法（物理及物理化学分析法） > 色谱分析 > 液相色谱分析法
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