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卡氏肺孢子虫肺炎动物模型实验诊断的研究

作　者: 常志尚
导　师: 宫玉香
学　校: 青岛大学
专　业: 病原生物学
关键词: 卡氏肺孢子虫卡氏肺孢子虫肺炎诊断 RNA原位杂交聚合酶链反应(PCR)
分类号: R-332
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 49次
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内容摘要

卡氏肺孢子虫是一种机会性致病的病原体,该虫可在免疫功能低下的人群中诱发致命性的卡氏肺孢子虫肺炎,尤其是CD4~+ T细胞功能缺陷者。随着艾滋病病人在我国不断的增加,以及为数众多的恶性肿瘤化疗、器官移植及接受免疫抑制剂治疗的患者,而我国目前对卡氏肺孢子虫实验室诊断大都依赖病原学常规染色,其敏感性和特异性易受不同的操作人员影响波动较大,并且其敏感性总体偏低,因此,急需建立一套简便、稳定、敏感性和特异性均高的诊断体系。本研究拟探讨改良的常规染色法和分子生物学方法在卡氏肺孢子虫实验诊断中的应用。目的:采用瑞氏-吉姆萨染色法、寡核苷酸探针RNA原位杂交(RNA in situ hybridization)技术和巢式PCR法检测卡氏肺孢子虫,并探讨这三种方法在卡氏肺孢子虫诊断中的应用。方法:Wistar雌性大鼠皮下注射地塞米松建立卡氏肺孢子虫肺炎动物模型。采用改进的病原学染色法瑞氏-吉姆萨染色法检测肺印片和BALF涂片。采用小亚单位RNA位点来源的寡核苷酸探针一条,地高辛加尾标记,对肺组织制备石蜡标本进行RNA原位杂交。采用Pc-ITS-PCR引物,对肺组织、BALF和血清标本进行巢式PCR法检测。结果:共检测了43只实验组大鼠,经瑞氏-吉姆萨染色后,在肺组织中查到的滋养体和/或包囊的阳性率为74.42%(32/43),BALF涂片阳性率为67.44%(29/43)。寡核苷酸探针RNA原位杂交法成功检测到肺组织内的虫体,实验组大鼠在第3周即检测到虫体,7～8周时检测到大量包囊,9～10周时滋养体大量出现,而空包囊多出现在8～9周,虫体分布于肺泡腔、肺泡壁及血管壁。大鼠实验组肺组织切片阳性率为88.37%(38/43)。巢式PCR方法电泳结果出现550bp条带清晰,无非特异条带出现,实验组肺组织、BALF和血阳性率分别为86.05%(37/43)、83.72%(36/43)和76.74%(33/43)。上述三种方法,对照组阳性率均为0%(0/16)。经统计学分析处理,原位杂交对该虫的检出率高于瑞氏-吉姆萨染色法,差别有显著统计学意义(p<0.01),原位杂交法与PCR法比较差别无统计学意义(p>0.05),PCR法对该虫的检出率高于瑞氏-吉姆萨染色法,差别有显著统计学意义(p<0.01)。结论:寡核苷酸探针RNA原位杂交法显示组织内虫体清晰,准确,在形态学

全文目录

引言  7-9
第一章材料和方法  9-24
  第一部分卡氏肺孢子虫感染动物模型的建立与病原学检查  9-10
  第二部分核酸原位杂交法检测组织内卡氏肺孢子虫  10-17
    1. 病理切片的制备  10-11
    2. 原位杂交检测  11-17
  第三部分 PCR方法检测卡氏肺孢子虫  17-22
    1 模板 DNA的制备  17-19
    2 PCR反应  19-22
  第四部分初步临床应用  22-23
  第五部分统计学处理  23-24
第二章结果  24-28
第三章讨论  28-33
结论  33-34
附图  34-47
参考文献  47-52
文献综述  52-61
致谢  61-62
学位论文独创性声明、学位论文知识产权权属声明  62

卡氏肺孢子虫肺炎动物模型实验诊断的研究

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