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家蝇野外品系与溴氰菊酯敏感品系的蛋白表达差异研究

作　者: 聂文敏
导　师: 高其康
学　校: 浙江大学
专　业: 农业昆虫与害虫防治
关键词: 二维液相色谱双向电泳家蝇蛋白质组溴氰菊酯敏感品系野外品系抗药性
分类号: R184
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 59次
引　用: 3次
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内容摘要

近年来,伴随人类基因组计划的顺利进行和完成,生命科学的研究进入后基因组时代。在这个时代,生命科学的主要研究对象已从基因组学研究向功能基因组学、蛋白质组学和细胞代谢组学等转移。家蝇是人类许多传染性疾病如霍乱、志贺氏菌病和沙门氏菌病等重要疾病的载体,对其采取有效的控制一直是人们研究工作中的重点。对其防治中的一个重要的问题之一在于家蝇的抗药性发展速度非常快。本论文利用二维液相色谱技术并结果传统的双向电泳技术,对家蝇野外品系和家蝇溴氰菊酯敏感品系成虫的总蛋白混合物进行了分离,对各分离数据用ProteoVue、DeltaVue和Imagemaster 2D platinum软件进行比对分析,获得了家蝇不同抗药性条件下的蛋白质差异表达谱。主要结果如下: 1.对家蝇野外品系和溴氰菊酯敏感品系成虫的蛋白质进行了二维液相色谱分离及数据分析,结果表明pⅠ大于8.4的碱性蛋白,家蝇野外品系检测到的蛋白峰为251个,溴氰菊酯敏感品系为237个。pⅠ值介于8.4-4.2的蛋白,家蝇野外品系检测到的蛋白峰228个,溴氰菊酯敏感品系为303个。pⅠ值小于4.2的酸性蛋白,家蝇野外品系检测到的蛋白峰132个,溴氰菊酯敏感品系为168个。所检测到的蛋白中,两者相比表达变化在两倍以上的有99个峰,其中在野外品系中表达上调的有43个,下调的56个;等电点pⅠ在8.4-4.2区段,野外品系中表达上调的有14个,下调的48个。 2.利用双向电泳技术对家蝇野外品系和家蝇溴氰菊酯敏感品系成虫的蛋白质进行了分析。家蝇野外品系检测到339个蛋白点,溴氰菊酯敏感品系450个蛋白点。发现家蝇野外品系pⅠ点在4-8的蛋白点占其总检测蛋白的94.44%,家蝇溴氰菊酯敏感品系pⅠ点在4-8的蛋白点占其总检测蛋白的94.98%。两者比较差异在2倍以上的蛋白点,在pⅠ在4-8区段,野外品系上调的蛋白点16个,下调的点52个。 3、综合家蝇蛋白质二维液相色谱技术和双向电泳技术的分离和分析结果,二维液相色谱技术共从两个材料中获得1319个峰,其中家蝇野外品系为611个,溴氰菊酯708个,这些峰均按保留时间进行收集。双向电泳共获得789个点,其中家蝇339个,溴氰菊酯敏感品系450个。二维色谱分离的组分比双向电泳多530个,多74%。无论是双向电泳还是二维液相色谱分离,其结果都是敏感品系比抗

全文目录

致谢  5-6
中文摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
目录  10-13
第一章综述  13-24
  1.1 家蝇的抗药性问题  13-14
  1.2 家蝇溴氰菊酯的抗性机制  14-16
  1.3 蛋白质组的研究进展  16-22
    1.3.1 向电泳技术在蛋白组学中的应用  17
    1.3.2 二维色谱技术在蛋白组学中的应用  17-22
      1.3.2.1 排阻色谱-反相色谱联用的方法(SEC-RPLC)  19
      1.3.2.2 离子交换色谱—反相色谱联用的方法(IEX-RPLC)  19-21
      1.3.2.3 液相等电聚焦—反相色谱联用的方法(IEF-RPLC)  21
      1.3.2.4 色谱聚焦—反相色谱联用的方法(CF-RPLC)  21
      1.3.2.5 亲和色谱—反相液相色谱与质谱联用的方法(AC-RPLC)  21-22
      1.3.2.6 分离蛋白质和分离多肽相结合的多维色谱方法  22
  1.4 选题依据及研究目的与意义  22-24
第二章家蝇不同抗性品系的蛋白表达图谱的差异研究  24-41
  2.1 实验材料  24
  2.2 药品及试剂  24-25
  2.3 主要仪器与设备  25
  2.4 试剂配制  25
  2.5 PF-2D原理详述  25-26
    2.5.1 第一维色谱聚焦技术  25-26
    2.5.2 第二维反相色谱法  26
  2.6 实验方法  26-41
    2.6.1 蛋白提取  26-27
    2.6.2 蛋白定量  27
    2.6.2 第一维色谱聚焦分离(HPCF-1D)  27
      2.6.2.1 色谱条件  27
      2.6.2.2 第一维色谱聚焦分离分析  27
    2.6.3 第二维高效反相色谱分析  27-28
      2.6.3.1 色谱条件  27-28
      2.6.3.2 第二维无孔硅胶C_(18)反相色谱分离  28
    2.6.4 软件分析  28
    2.6.4 结果与分析  28-41
      2.6.4.1 第一维分离图谱  28-33
      2.6.4.2 第二维分离图谱  33-41
第三章基于双向电泳构建的蛋白表达图谱的差异比较  41-47
  3.1 实验材料  41
  3.2.药品及来源  41
  3.3.药品配制  41-42
  3.4 主要仪器与设备  42
  3.5 实验方法  42-47
    3.5.1 蛋白提取  42
    3.5.2 蛋白测定  42
    3.5.3 双向电泳方法  42-44
      3.5.3.1 第一向等电聚焦  42-43
      3.5.3.1 第二向SDS-PAGE电泳  43-44
      3.5.3.1 银染实验程序如下：  44
    3.5.4 分析  44
    3.5.5 结果  44-47
第四章讨论  47-51
  4.1 家蝇材料的选择  47-48
  4.2 蛋白质组学方法研究昆虫抗药性  48-49
  4.3 本论文的主要创新点  49
  4.4 研究展望  49-51
参考文献  51-56

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