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大车前（Plantago major L. "Giant Turkish."）体外优化再生体系的建立及Na～+/H～+逆向转运蛋白基因SeNHX1和TtNHX1的功能鉴定

作　者: 李平
导　师: 李银心
学　校: 中国科学院研究生院（植物研究所）
专　业: 细胞生物学
关键词: 大车前(Plantago major L.“Giant Turkish.”) 体外培养 TtNHX1 SeNHX1 酵母互补
分类号: S567.239
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

大车前(Plantago major L. "Giant Turkish.")不仅有很高的药用价值,在生态学研究方面也是重要模式植物。大车前的组织培养工作,目前报道很少。对其组织培养体系的建立,为筛选大车前耐盐突变体和基因转化建立高效的体外再生系统和实验平台体系。通过愈伤组织诱导和直接不定芽再生途径,建立了大车前(Plantago major L. "Giant Turkish.")的快速高效再生系统。叶片外植体在含有1.0 mg/L NAA的MS培养基中培养3周后,形成愈伤组织,愈伤组织在含4.0 mg/L 6-BA的MS培养基中成功再生,得到完整植株。种子外植体在含0.2 mg/L IAA和1.0 mg/L TDZ的MS培养基中培养4周后产生大量的丛生芽,对9株再生植株进行RAPD检测表明,部分植株在DNA水平上发生了变异。植物抵御盐胁迫的一个重要机制是在液泡中积累Na+,从而使细胞质内Na~+保持在较低水平,并且降低细胞渗透势。Na+运输到液泡是由液泡Na+/H+逆向转运蛋白完成的。本实验室已从盐生植物盐角草(Salicornia europaea)和番杏(Tetragonia tetragonioides)中分别克隆得到SeNHX1和TtNHX1基因。本文研究了SeNHX1和TtNHX1基因在酵母突变体里的作用。TtNHX1和SeNHX1蛋白在缺陷型酵母菌株里的表达能够提高这些菌株对NaCl、LiCl和潮霉素的抗性,提高到与野生型相当的抗性水平。说明TtNHX1和SeNHX1有着与酵母ScNHX1相似的细胞定位和作用机制,是ScNHX1的功能类似蛋白。

全文目录

中文摘要  3-4
英文摘要  4-9
缩略语  9-10
第一章文献综述  10-35
  第一节植物耐盐育种  10-15
    1. 传统育种  11
    2. 生物技术育种  11-15
  第二节植物组织培养概述  15-18
    1. 组织培养概述  15
    2. 组织培养方法  15-16
    3. 植物生长调节物质对植物组织培养形态建成的调节控制  16-18
    4. 组织培养的应用  18
  第三节车前属植物研究进展  18-24
    1. 车前属分类学研究  19
    2. 车前属生态研究  19-20
    3. 车前属生殖  20-21
    4. 车前属植物的应用价值  21-22
    5. 车前的核型  22-23
    6. 车前属植物受胁迫  23-24
    7. 车前组培  24
  第四节 Na~+/H~+逆向转运蛋白研究进展  24-28
    1.N a+/H+逆向转运蛋白与植物耐盐性  24-26
    2.N a+/H+逆向转运蛋白功能的研究  26-27
    3. 盐生植物与甜土植物耐盐相关同源基因的比较  27-28
  第五节酵母真核表达系统  28-32
    1. 酵母菌  28-29
    2. 酿酒酵母真核表达系统  29-30
    3. 酵母转化方法  30-31
    4. 酵母耐盐机制的研究进展  31-32
  第六节预期目标和技术路线  32-35
    1. 预期目标  32-33
    2. 技术路线  33-35
第二章材料与方法  35-47
  第一节实验材料  35-39
    1. 植物材料  35
    2. 培养基  35-37
    3. 菌株  37
    4. 载体  37
    5. 基因  37-39
  第二节实验方法  39-47
    1. 植物组织培养方法  39
    2. 再生植株的RAPD 检测  39
    3. 大车前田间耐盐鉴定  39-40
    4. 耐盐细胞系的筛选  40
    5. 构建载体  40-44
    6. 转化酵母  44-46
    7. 酵母功能互补实验  46-47
第三章实验结果  47-63
  第一节大车前的组织培养  47-52
    1. 愈伤组织的诱导和分化  47-49
    2. 直接不定芽再生  49-52
  第二节大车前耐盐细胞系的筛选  52-56
    1. 田间耐盐鉴定  52
    2. 大车前耐盐细胞系的筛选  52-56
  第三节酵母互补实验  56-63
    1. 载体构建  56-60
    2. 转化酵母  60-61
    3. 酵母互补实验  61-63
第四章讨论  63-67
  第一节大车前的组织培养  63-65
  第二节大车前耐盐细胞系的筛选  65
  第三节酵母互补实验  65-66
  第四节结论  66-67
参考文献  67-75
发表文章  75-76
致谢  76

大车前（Plantago major L. "Giant Turkish."）体外优化再生体系的建立及Na～+/H～+逆向转运蛋白基因SeNHX1和TtNHX1的功能鉴定

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