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抗内毒素IgY-F（ab′）_2的制备与体外生物学效应研究

作　者: 史政荣
导　师: 张雅萍
学　校: 第三军医大学
专　业: 外科学
关键词: 鸡蛋黄免疫球蛋白F（ab′）2 内毒素异硫氰酸荧光素-内毒素白细胞介素肿瘤坏死因子内毒素血症烧伤
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

烧伤后肠道三大屏障功能均有不同程度下降,包括肠粘膜机械屏障损害,出现粘膜糜烂及溃疡;肠道内固有菌群失调;全身免疫系统功能降低,肠腔内sIgA 水平下降。这些因素造成了肠腔内细菌和内毒素（lipopolysacchoride,LPS）进入血液循环,即细菌和LPS 移位,形成菌血症或内毒素血症（intestinal endotoxemia,ITEM）,这是导致全身性感染及多器官功能哀竭的重要原因之一,但目前尚无特别有效的拮抗LPS 的药物应用于临床。近年来,发现在鸡蛋的蛋黄中富含来源于鸡血清的免疫球蛋白（immunoglobulin G, IgG）,国际上命名为immunoglobulin yolk（IgY）,其含量远高于血清,且对相应的抗原有较强的拮抗作用。而IgY 含有F（ab′）₂段和Fc 段,其中F（ab′）2段具有完全的抗体活性,而Fc 段可引起过敏反应。本研究旨在寻求一种既能有效拮抗LPS,又能减少过敏反应的新药。本研究用LPS 免疫纯系来亨（Leghorn）鸡,通过改良水溶法（water dissolve WD 法）从蛋黄中提取、纯化特异性抗内毒素免疫球蛋白IgY,再用胃蛋白酶将IgY 酶切为F（ab′）2段和Fc 段,Fc 段进一步被胃蛋白酶切为无功能的小分子片段,纯化抗内毒素IgY-F（ab′）₂ 并对其生物学特性进行鉴定。光密度法检测抗内毒素IgY-F（ab′）₂含量为1.04mg/mL 蛋黄液,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测抗内毒素IgY-F（ab′）₂ 效价为1:25600,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其分子量为24KD、纯度为90%,免疫印迹法（Western-blotting）测定其与鸡血清中的IgG有相同的抗原性。抗内毒素IgY-F（ab′）₂系通过大肠埃希菌来源之LPS 免疫鸡制备,研究中培养了铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、普通变形杆菌四种临床常见致病菌,通过酚水法提取四种致病菌来源的LPS,通过内毒素定量检测证实大肠埃希菌来源之LPS免疫鸡制备之抗内毒素IgY-F（ab′）₂对其他细菌（铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、普通变形杆菌）来源之LPS 均有拮抗作用,且当IgY-F（ab′）₂剂量为0.5mg/mL LPS 时对其有较强的生物学效应。LPS 通过其活性中心脂质A（Lipid A）与效应细胞结合后,导致单核/巨噬细胞活化释放肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor,TNF-α）和白细胞介素（Interleukin,IL-6）等细

全文目录

英文缩写  4-5
英文摘要  5-7
中文摘要  7-9
论文正文  9-62
  前言  9-11
  第一部分抗内毒素 IgY-F(ab′)_2 的制备  11-15
    材料和方法  11-12
    结果  12-13
    讨论  13-15
  第二部分抗内毒素 IgY-F(ab′)_2 鉴定  15-28
    材料和方法  15-19
    结果  19-23
    讨论  23-28
  第三部分抗内毒素 IgY-F(ab′)_2 体外生物学效应  28-46
    材料和方法  28-32
    结果  32-41
    讨论  41-46
  全文结论  46-47
  致谢  47-48
  照片  48-56
  参考文献  56-62
文献综述 IgY:一种特殊免疫球蛋白  62-67
  参考文献  66-67
在读硕士期间论文发表情况  67

抗内毒素IgY-F（ab′）_2的制备与体外生物学效应研究

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