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含IL-2的细胞因子组合诱导K562细胞分化成杀伤细胞的研究

作　者: 孙蓬蓬
导　师: 赵春亭
学　校: 青岛大学
专　业: 内科学
关键词: K562细胞 NK细胞 NKT细胞 钙离子载体 细胞因子 MTT试验
分类号: R733.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要


目的 探讨含rhIL-2的不同细胞因子组合诱导K562细胞向杀伤细胞转化的可能性。 方法 1.分组 取对数生长期的K562细胞,以5×105/ml的浓度接种至24孔板中,并于实验组中加入不同的细胞因子,分为A、D、E组:A组:rhIL-2,终浓度分别为250U/ml、500U/ml、1000U/ml,简称为A-250组、A-500组、A-1000组;D组:rhIL-2（1000U/ml）+rhIL-15（100ng/ml）;E组:rhIL-2（250U/ml）+rhIL-15（100ng/ml）+A23187（250ng/ml）,37℃饱和湿度,5%CO2培养箱中培养40天,隔3天半量换液并给实验孔补加半量诱导因子,对照孔只补充新鲜的培养液;分别于诱导第10天和第20天开始向各A组细胞培养液中添加A23187（250ng/ml）建立B组（B-250组、B-500组、B-1000组）和C组（C-250组、C-500组、C-1000组）,37℃饱和湿度,5%CO2培养箱中继续培养至40天,隔3天半量换液并给实验孔补加半量诱导因子（rhIL-2,A23187）,对照孔只补充新鲜的培养液。2.形态学观察 通过倒置显微镜观察诱导细胞形态学的动态变化并摄相。3.免疫表型鉴定 运用流式细胞术分别于诱导第10、20、30和40天检测诱导后细胞表面分子CD3、CD16/56表达率,以了解诱导前后及不同方法诱导K562细胞表面分子的差异。4.免疫组织化学染色 进一步明确细胞表面CD56、CD16的表达。5.功能检测 MTT法检测诱导细胞对靶细胞（K562细胞）的杀伤作用。 结果 上述不同细胞因子组合均能诱导K562细胞向NK/NKT转化。1.形态学 诱导第5天可以观察到实验组部分细胞体积增大,第10天时A-1000组和D组、E组的诱导率在8.08—9.08%之间,高于A-250组（5.25%）和A-500组（5.08%）,差别有统计学意义（P<0.05）,随着时间延长,各组诱导率均逐渐增加,第40天时诱导率达到60.83-65.91%,各实验组间差别无统计学意义（P均>0.05）,与对照组相比差别有统计学意义（P均<0.05）。2.免疫表型鉴定诱导第30天时C组开始检测到杀伤细胞,但表达率极低(CD3-CD16/56+NK:1.16-1.21%,CD3+CD16/56+NKT:0.40-0.50%),其它实验组均检测不到杀伤细胞;诱导第40天时,所有实验组均检测到CD3-CD56+NK细胞和CD3+CD56+NKT细胞,联合rhIL-15的实验组（D组、E组）的诱导率(CD3-CD16/56+NK:11.37-11.61%,CD3+CD16/56+NKT:3.07-3.44%)高于不含rhIL-15的实验组(CD3-CD16/56+NK:5.75-6.13%,CD3+CD16/56+NKT:1.13-1.26%),差别

全文目录


引言(Preface)  7-8
材料与方法(Materials and Methods)  8-13
结果(Results)  13-28
讨论(Discussion)  28-33
结论(Conclusion)  33-34
参考文献(References)  34-38
综述(Review)  38-52
参考文献(References)  52-58
致谢(Acknowledgement)  58-59
声明(Announcement)  59-60

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 造血器及淋巴系肿瘤 > 白血病
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