学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

蚊抗药性相关新基因NYD-Ch和NYD-Tr的初步功能研究

作　者: 顾燕
导　师: 朱昌亮
学　校: 南京医科大学
专　业: 病原生物学
关键词: 抗药性 NYD-Ch NYD-Tr 昆虫细胞表达载体稳定转染 MTT 细胞存活率
分类号: R384.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
下　载: 55次
引　用: 2次
阅　读: 论文下载

内容摘要

【目的】研究抗药性相关糜蛋白酶基因(NYD-Ch)和胰蛋白酶基因(NYD-Tr)与抗药性之间的关系。【材料和方法】采用PCR方法,以淡色库蚊抗性品系cDNA文库为模板,扩增出抗性品系中高表达的NYD-Ch和NYD-Tr,经T/A克隆测序鉴定后,扩增纯化质粒,经酶切后纯化目的片段亚克隆到真核表达载体pIE1-3中,用PCR结合酶切鉴定,核酸测序验证。将上述重组表达载体分别单独转入和共转入蚊细胞,经筛选获得稳定转染的细胞系,RT-PCR和Western blotting鉴定目的基因的稳定表达,并用MTT和流式检测稳定表达的细胞对溴氰菊酯杀虫剂的敏感性。【结果】成功构建昆虫细胞表达载体并建立稳定转染细胞系,使目的基因在其中稳定表达。MTT结果显示:pIE1-3/NYD-Ch单独转染组,细胞存活率与对照组无显著性差异(p>0.05);pIE1-3/NYD-Tr单独转染组,120μM溴氰菊酯浓度时,其细胞存活率较空载体组和未转染组分别增加38.20%(p<0.05)和9.66%(p>0.05);pIE1-3/NYD-Ch和pIE1-3/NYD-Tr共转染组,120μM溴氰菊酯浓度时,其细胞存活率较空载体组和未转染组分别增加67.37%(p<0.01)和38.83%(p<0.001);160μM药物浓度时,其细胞存活率较空载体组和未转染组分别增加48.83%(p<0.05)和24.26%(p<0.05)。【结论】NYD-Ch和NYD-Tr在细胞对抗溴氰菊酯的毒性作用中有一定的保护力,提示NYD-Ch和NYD-Tr与抗药性相关。

蚊抗药性相关新基因NYD-Ch和NYD-Tr的初步功能研究

内容摘要

全文目录

相似论文