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肿瘤标志物免疫分析新方法与临床应用研究

作　者: 严枫
导　师: 胡效亚
学　校: 扬州大学
专　业: 分析化学
关键词: 抗原抗体肿瘤标志物免疫分析流动注射分析时间分辨荧光分析技术传感器生物传感器免疫传感器非竞争免疫分析夹心免疫反应 CA19-9 CEA 肺癌小细胞肺癌 ProGRP
分类号: R730.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

肿瘤标志物(Tumor markers,TM),在恶性肿瘤的辅助诊断、疗效监测、预后判断等方面具有非常重要的应用价值。因此,不断探索新的TM及其检测方法研究已经成为肿瘤防治的热点课题之一。流动注射分析(Flow iniection analysis,FIA)能在非平衡状态下高效率地完成试样的在线处理与测定,因而分析速度快、重现性好、易于自动化,已被广泛地应用于临床诊断、药物分析、环境和食品质量监控与处理等方面。电化学与化学发光免疫传感器(Electrochemical and chemiluminescent immunosensors)和时间分辨荧光免疫检测技术(Time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)以其高灵敏度、高特异性、高准确度等优点而倍受关注。这些检测技术与分析方法的结合,为肿瘤标志物的高效检测奠定了基础。本文围绕肿瘤标志物的临床应用、流动注射-时间分辨荧光免疫分析新方法的建立和电化学与化学发光免疫传感器的研制等方面,开展了以下工作: 1.肿瘤标志物一胃泌素前体释放肽在肺癌诊断中的应用价值 ProGRP(Progastrin-releasing peptide)是脑肠激素的一种,是胃泌素释放肽(gastrin-releasing peptide,GRP)的前体。前人已建立检测ProGRP的酶免疫测定方法(Enzyme immunoassay,EIA)并用于小细胞肺癌(Small cell carcinoma,SCLC)的免疫珍断。本文利用该方法,对78例SCLC患者、15例肺良性疾病(肺结核、肺气肿、气胸)患者,15例健康人血清中ProGRP含量进行测定并对比分析,探讨了ProGRP在肺癌诊断中的应用价值。结果显示,SCLC患者血清ProGRP水平显著高于对照组(P<0.01);以大于46pg/ml为临界值,ProGRP对SCLC的阳性率高达64.6%;患者血清ProGRP与神经元特异性烯醇化酶(Neuron specific enolase,NSE)水平呈高度正相关,r=0.9,P<0.01。肺癌患者血清中ProGRP水平检测可望成为小细胞肺癌的辅助诊断指标。

全文目录

中文摘要  6-9
英文摘要  9-12
第一章绪论  12-32
  1．1 肿瘤标志物  12-14
    1．1．1 肿瘤标志物的发展史  12-13
    1．1．2 肿瘤标志物的临床价值  13-14
  1．2 时间分辨荧光免疫分析  14-19
    1．2．1 免疫分析的概论  14-15
    1．2．2 抗体的基本结构  15-16
    1．2．3 多克隆抗体和单克隆抗体  16-17
    1．2．4 时间分辨荧光免疫分析  17-19
      1．2．4．1 时间分辨荧光免疫分析原理  17-18
      1．2．4．2 免疫反应后标记物的测量  18-19
      1．2．4．3 时间分辨荧光免疫分析的应用  19
  1．3 流动注射免疫分析  19-24
    1．3．1 流动注射分析(Flow injection analysis，FⅠA)  19
    1．3．2 流动注射免疫分析(Flow injection immunoassay，FⅡA)  19-24
      1．3．2．1 均相流动注射免疫分析方法  20
      1．3．2．2 非均相流动注射免疫分析方法  20-24
  1．4 免疫传感器在肿瘤标志物检测中的应用  24-28
    1．4．1 电化学免疫传感器及其在肿瘤标志物检测中的应用  24-25
    1．4．2 肿瘤标志物的质量与热量免疫传感器  25-26
    1．4．3 光学免疫传感器用于肿瘤标志物检测  26-27
    1．4．4 肿瘤标志物免疫传感器与其它技术联用  27-28
    1．4．5 肿瘤标志物免疫传感器的发展趋势  28
  1．5 本论文创新点  28-29
  1．6 参考文献  29-32
第二章肺癌患者血清胃泌素前体释放肽检测与临床应用  32-38
  2．1 引言  32-33
  2．2 材料和方法  33-34
    2．2．1 研究对象  33
    2．2．2 试剂和仪器  33
    2．2．3 标本处理  33-34
    2．2．4 ProGRP酶免疫检测  34
    2．2．5 统计学处理  34
  2．3 结果  34-36
    2．3．1 标准曲线  34
    2．3．2 血清ProGRP含量  34-35
    2．3．3 血清中ProGRP的阳性率  35-36
    2．3．4 小细胞肺癌患者ProGRP浓度与NSE浓度相关性  36
  2．4 讨论  36-37
  2．5 参考文献  37-38
第三章癌胚抗原的流动注射-时间分辨荧光免疫分析新方法  38-48
  3．1 引言  38-39
  3．2 材料与方法  39-41
    3．2．1 材料与试剂  39-40
    3．2．2 仪器  40
    3．2．3 免疫亲和柱的制备  40
    3．2．4 用时间分辨荧光检测法对CEA进行流动注射免疫分析  40-41
  3．3．结果与讨论  41-46
    3．3．1 对抗体修饰的免疫亲和柱制备的优化  41-42
    3．3．2 免疫分析步骤的优化  42-43
    3．3．3 时间分辨荧光检测的优化  43-44
    3．3．4 用时间分辨荧光法进行CEA检测的流动注射免疫分析  44-45
    3．3．5 准确性和临床应用  45
    3．3．6 免疫亲和柱的稳定性  45-46
  3．4 结论  46
  3．5 参考文献  46-48
第四章肿瘤标志物的电化学与化学发光免疫传感器的研制与应用  48-68
  4．1 引言  48-50
  4．2 实验部分  50-54
    4．2．1 试剂  50-51
    4．2．2 免疫传感器的制备  51-52
    4．2．3 仪器  52-53
    4．2．4 非竞争流动注射免疫分析  53-54
    4．2．5 CEA的电化学免疫分析  54
  4．3 结果与讨论  54-65
    4．3．1 化学发光免疫传感器制备的条件选择  54-55
    4．3．2 化学发光免疫分析过程的优化  55-57
      4．3．2．1 最佳抗体浓度的选择  55
      4．3．2．2 最佳免疫反应温育时间的选择  55
      4．3．2．3免疫混合液通过传感器的最佳流速的选择  55-57
    4．3．3 流动注射化学发光检测的条件优化  57
    4．3．4 流动注射非竞争免疫分析法检测CA19-9  57-59
    4．3．5 CA19-9免疫传感器的稳定性和免疫分析法的准确性及临床应用验证  59-60
    4．3．6 CEA免疫传感器的电化学行为  60-61
    4．3．7 CEA免疫传感器对H_2O_2的循环伏安响应  61-62
    4．3．8 电化学免疫分析条件的优化  62-64
    4．3．9 CEA的安培测定  64-65
    4．3．10 CEA安培免疫传感器的精确性、制备重复性、储存稳定性和临床应用  65
  4．4 结论  65-66
  4．5 参考文献  66-68
附录  68-69
致谢  69

肿瘤标志物免疫分析新方法与临床应用研究

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