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应用DGGE技术分析白色念珠菌定植对小鼠肠道微生物区系的影响

作　者: 黄雪峰
导　师: 魏泓
学　校: 西南大学
专　业: 动物学
关键词: 白色念珠菌定植肠道微生物区系细菌多样性变形梯度凝胶电泳
分类号: Q939.91
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 336次
引　用: 3次
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内容摘要

肠道微生物区系在哺乳动物的健康和疾病中起着十分重要的作用,然而对这个复杂的微生物生态系统及其微生物多样性至今仍然缺乏了解。其关键性生理功能包括保护粘膜上皮损伤,调节脂肪的储存,刺激肠道血管生成和竞争拮抗致病菌的定植。大部分肠道致病菌在肠道内的定植是其致病的第一步,且这种定植必须与肠道复杂的微生物区系进行相互竞争,但是致病菌定植是否会引起肠道微生物区系结构的变化目前仍然不清楚。由于培养方法在肠道微生物分离培养上的局限性,大量研究者开始转向运用分子指纹图谱技术分析肠道微生物区系。基于16S rRNA基因的变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)技术具有直观、快速和高通量的优点,适合于分析复杂的微生物菌群。尽管该方法在对特异的细菌成员的系统发生鉴定上是很困难的,但是DGGE技术能够快速提供复杂微生物区系的丰富度和均匀度信息。本研究应用DGGE技术分析了白色念珠菌(Candida albicans)在小鼠盲肠中定植后对肠道微生物区系结构变化的影响。雌性SPF级BALB/c小鼠通过口服头孢曲松水溶液5d,随后单次口服灌胃C.albicans SC5314,这种处理导致了小鼠肠道细菌微生物区系变化,以及C.albicans在肠道内低水平的定植至少1wk。使用16S rDNA的V3区和V6～V8区的通用引物对细菌微生物区系的DGGE分析表明,相对于正常小鼠和抗生素处理小鼠,C.albicans SC5314定植小鼠盲肠后,导致盲肠总体微生物多样性的显著降低(P<0.05)。这种细菌多样性降低很大程度上是由于抑制部分微生物区系再定植而导致的。使用16s rDNA的属或者组特异性引物(肠球菌属、乳杆菌组和双歧杆菌属)的DGGE分析表明,C.albicans SC5314定植小鼠盲肠后,相对于正常小鼠和抗生素处理小鼠,

全文目录

中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
文献综述  10-22
  1. 肠道细菌与宿主共生的研究进展  10-14
  2. 肠道细菌微生物区系的分子微生物生态学分析  14-17
  3. DGGE技术及其在肠道微生物生态学中的应用  17-22
论文正文应用 DGGE技术分析白色念珠菌定植对小鼠肠道微生物区系的影响  22-44
  前言  22-23
  1. 实验材料  23-26
    1.1 实验菌株  23
    1.2 实验动物  23
    1.3 主要试剂  23-24
    1.4 主要仪器  24-25
    1.5 主要溶液及试剂配制  25-26
  2. 实验方法  26-29
    2.1 C.albicans的鉴定  26
    2.2 抗生素诱导的 C.albicans定植  26-27
    2.3 组织 CFU检测  27
    2.4 肠道细菌微生物区系的 DGGE分析  27-29
    2.5 统计学分析  29
  3. 结果  29-41
    3.1 C.albicans的鉴定  29-31
    3.2 抗生素对小鼠盲肠微生物区系的影响  31
    3.3 C.albicons SC5314的定植  31-32
    3.4 C.albicons SC4314定植7d后盲肠细菌微生物区系的 DGGE分析  32-41
  4. 讨论  41-44
参考文献  44-52
附录  52-55
致谢  55

应用DGGE技术分析白色念珠菌定植对小鼠肠道微生物区系的影响

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