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吴茱萸“温通心阳”功效的基础性研究

作　者: 王晖
导　师: 张丽艳
学　校: 贵阳中医学院
专　业: 中药学
关键词: 疏毛吴茱萸吴茱萸总碱 HPLC UPLC 特征图谱液质联用
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Euodia rutoecarpa(Juss.) Benth.、石虎E.rutaecarpa (Juss.) Benth. var. officinalis (Dode) Huang或疏毛吴茱萸E.rutaecarpa (Juss.) Benth. var. bodinieri (Dode) Huang的干燥近成熟的果实。吴茱萸始载于《神农本草经》,是贵州省著名的道地药材。吴茱萸味辛性热,具有“温通心阳”的作用,为临床上常用的温中散寒药。几千年来,中医认为辛热药物具有药效显著、药力较猛、归经以五脏的心、肝、肾为主的药性特点。本实验在详细地研究总结了前人的研究基础上,以贵州余庆GAP种植基地产疏毛吴茱萸为代表,本着传统、简单、易重现的原则,对其“温通心阳”功效的物质基础进行了探索性研究。研究结果如下：1、疏毛吴茱萸药材的水、醇提取工艺优化。分别采用正交试验设计优选疏毛吴茱萸水提取、醇提取的工艺条件,研究表明：疏毛吴茱萸水提物制备的最佳工艺条件为：用10倍量水,煎煮3次,每次煎煮120分钟,疏毛吴茱萸醇提物制备的最佳工艺条件为：用6倍量60%的乙醇回流提取3次,每次120分钟。通过HPLC含量测定对比、TLC图谱鉴定、HPLC特征图谱比较的方法,对疏毛吴茱萸水提物、醇提物的干燥方法的考察,结果表明：减压干燥、微波干燥、冷冻干燥对提取物的质量无显著性影响,因此可从节能、减耗、省时等多方面根据实际情况,选择适宜的干燥方法。2、疏毛吴茱萸水、醇提取物HPLC特征图谱研究。对吴茱萸水、醇提取物HPLC特征图谱进行了系统研究,建立了吴茱萸提取物的特征图谱方法：色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6×150 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸水,采用流动相二元梯度洗脱系统(时间：0 min～5min～38 min～65min,乙腈比例：5%～5%～23%～100%),流速为1mL·min-1,检测波长为258nm,柱温30℃。该指纹图谱方法经方法学考察,精密度、稳定性、重复性良好,同时标示出吴茱萸醇提物20个特征峰和水提取物19个特征峰。3、液质联用技术对疏毛吴茱萸提取物特征图谱中色谱峰的定性分析。采用电喷雾电离-串联质谱的方式建立了UPLC-MS/MS分析方法,在已有文献基础上,参考吴茱萸所含有的化合物的色谱行为以及质谱的裂解规律,通过优化二元梯度洗脱及质谱的性能参数,鉴定了其中8个活性成分,分别是绿原酸及其异构体、槲皮素-3-0-β-D半乳糖苷、去氢吴茱萸碱、柠檬苦素、14-甲酰基二氢吴茱萸次碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱。液质联用能快速、准确地鉴定疏毛吴茱萸提取物主要有效成分,丰富了特征图谱反映的化学信息,也为更好地阐明中药作用的物质基础和作用机制提供一定的依据。4、疏毛吴茱萸水、醇提取物化学成分和生物活性比较及“温通心阳”类药物特征图谱比较。疏毛吴茱萸水、醇提取物总生物碱的转移率分别为5.45%和71.22%；另外,在疏毛吴茱萸水提物、醇提物和药材的HPLC特征图谱比较中发现,水、醇提取物特征图谱与药材的特征图谱相似度为分别为0.545%和0.933%,两种结果均表明,醇提物对于药材的化学成分保留较水提物好。通过水提物、醇提物的HPLC特征图谱的比较,我们发现,不同极性的提取部位峰面积有一定的差别。通过三种“温通心阳”药物(吴茱萸、附子、干姜)的水提物HPLC图谱比较我们未发现有共同的色谱峰,初步证明它们没有共同的作用物质。通过进一步的药效筛选实验也表明,醇提物对于大鼠左心室内压和心律的促进作用大于水提物,证实了醇提物质量优于水提物,此结果为疏毛吴茱萸有效部位的进一步定位奠定了基础,也为临床用药方式提供了有力的参考价值。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-11
前言  11-13
第一部分疏毛吴茱萸药材的水、醇提取工艺优化  13-26
  1 仪器与试药  13
  2 水提工艺正交试验与结果  13-17
  3 醇提工艺正交试验与结果  17-20
  4 两种最佳工艺总生物碱转移率的测定  20
  5 不同干燥方式对水、醇提取物质量影响的考察  20-24
  6 小结  24-26
第二部分疏毛吴茱萸提取物HPLC 特征图谱研究  26-52
  1 仪器与试药  26
  2 色谱条件的考察  26-34
  3 供试品溶液制备方法的优化  34-38
  4 特征图谱的方法学考察  38-50
  5 小结  50-52
第三部分液质联用技术对疏毛吴茱萸提取物特征图谱中色谱峰的定性分析  52-61
  1 仪器与试药  52
  2 实验方法  52-53
  3 结果与讨论  53-60
  4 小结  60-61
第四部分疏毛吴茱萸水、醇提取物化学成分和生物活性比较及"温通心阳"类药物特征图谱比较  61-67
  1 特征峰的标定、比较与辨认  61-63
  2 疏毛吴茱萸水、醇提取物及药材对大鼠心脏机能的影响  63
  3 三种"温通心阳"类药物的HPLC、UPLC特征图谱比较  63-65
  4 小结  65-67
结论和展望  67-68
创新点  68-69
参考文献  69-71
附录一缩略语表  71-72
附录二综述  72-86
  参考文献  83-86
附录三致谢  86-87
附录四个人简历  87

吴茱萸“温通心阳”功效的基础性研究

内容摘要

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