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酶育牛黄与天然牛黄化学成分的比较研究

作　者: 李珂
导　师: 王唯红；齐永秀
学　校: 山东大学
专　业: 药物分析
关键词: 酶育牛黄天然牛黄指纹图谱含量测定
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

牛黄为牛的胆结石,是一种疗效确实的名贵中药材。主要化学成分有胆酸、去氧胆酸、鹅去氧胆酸、胆红素等。具有清热、豁痰、开窍、凉肝、息风、解毒功效。酶育牛黄是以新鲜牛胆汁为原料根据天然牛黄形成原理,采用酶法制备的牛黄。本项目建立了酶育牛黄与天然牛黄的指纹图谱研究方法：对酶育牛黄和天然牛黄中的胆汁酸、胆红素、胆固醇、微量元素等成分进行了系统比较研究。通过系统研究,对酶育牛黄与天然牛黄的一致性进行评价,为酶育牛黄的新药开发和产品质量控制标准提供实验依据和技术资料。课题研究主要内容及结果如下：一、酶育牛黄与天然牛黄中二甲基亚砜提取成分的定性与定量比较研究建立了酶育牛黄与天然牛黄HPLC指纹图谱,比较了两种牛黄该类成分指纹图谱的异同。10批酶育牛黄的HPLC指纹图谱相似度较高,提示酶育牛黄的生产制备工艺较稳定。但在天然牛黄的10个共有色谱峰中,酶育牛黄中可以检测到5个色谱峰,其中多数色谱峰的信号强度低于天然牛黄,主要成分胆红素含量酶育牛黄较天然牛黄低,但酶育牛黄中也有一成分比天然牛黄高,表明酶育牛黄与天然牛黄二甲基亚砜提取成分的种类及含量存在一定差异。建立了胆红素的HPLC含量测定方法,采用C18色谱柱,甲醇-氯仿-1%醋酸(65：32：3)流动相系统,检测波长450m,流速1.0 mL·min-1、酶育牛黄与天然牛黄中的含量分别为9.35μg·mg-1、45.32μg·mg-1,,两种牛黄中胆红素的含量差异明显。二、酶育牛黄与天然牛黄中胆汁酸类成分的定性与定量比较研究建立了酶育牛黄与天然牛黄HPLC-ELSD指纹图谱。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统的操作规范(版本2004A)软件分别对10批酶育牛黄与天然牛黄色谱图进行分析,建立了天然牛黄色谱指纹图谱共有模式,并与10批酶育牛黄的指纹图谱进行了比较。10批酶育牛黄药材指纹图谱的相似度分别为0.980、0.991、0.979、0.990、0.984、0.992、0.983、0.989、0.991和0.983,表明不同批次酶育牛黄的相似度较高,说明酶育牛黄生产制备工艺稳定。10批酶育牛黄与天然牛黄共有模式色谱图比较相似度较低,天然牛黄中胆酸类成分有8个共有色谱峰,酶育牛黄也检出8个色谱峰,其中1、2、4、5、6色谱峰与天然牛黄胆酸类成分的共有色谱峰相同,但4、5号色谱峰的信号强度较弱；在酶育牛黄中未检测到第3、7、8号色谱峰,但检测到天然牛黄中未检出的第9、10、11号色谱峰,表明酶育牛黄与天然牛黄的胆酸类成分存在一定差异。建立了6种胆酸的HPLC-ELSD含量测定方法,并对两种牛黄中的胆酸含量进行了比较。采用C18色谱柱,ELSD检测器,甲醇和0.1%的醋酸水溶液梯度洗脱流动相系统。两种牛黄各自3个批次之间的胆酸类成分及其含量一致,但两种牛黄之间的胆酸类成分及含量存在差异。天然牛黄中检测到胆酸、鹅去氧胆酸和去氧胆酸3种胆酸类成分；酶育牛黄中检测到胆酸、鹅去氧胆酸和猪去氧胆酸3种胆酸类成分,即两种牛黄均含有胆酸、鹅去氧胆酸二种共有成分,并各含有一种不同的胆酸类成分,其各种胆酸类成分含量存在差异。三、酶育牛黄与天然牛黄中微量元素的比较研究采用火焰原子吸收光谱法和石墨炉原子吸收光谱法测定了牛黄中12种元素。酶育牛黄中的Cu、Zn、Fe、Mn、Ca、Mg、K、Na等8种元素与天然牛黄中的含量无明显差异,Pb, Cr、Ni、Cd等重金属含量与天然牛黄相比差异较小。通过对酶育牛黄与天然牛黄中微量元素的比较研究,为评价和开发利用酶育牛黄提供了实验依据。四、酶育牛黄与天然牛黄中胆固醇的定量比较研究建立了胆固醇的HPLC-ELSD测定法,采用C18色谱柱,ELSD检测器,以乙腈和异丙醇(1：1)为流动相,测定了两种牛黄中胆固醇的含量,三批天然牛黄中的含量分别为6.53μg·mg-1、5.69μg·mg-1、5.12μg·mg-1,三批酶育牛黄中的含量分别为2.78μg·mg-1、2.34μg·mg-1、2.13μg·mg-1,天然牛黄中胆固醇含量高,提示可能与天然牛黄体内成石机理有关。

全文目录

摘要  8-10
ABSTRACT  10-13
符号说明  13-14
第一章牛黄研究进展  14-23
  1 天然牛黄概述  14-15
  2 牛黄代用品的研究  15-17
  3 牛黄药理作用的研究  17-18
  4 牛黄化学成份及其含量测定方法的研究进展  18-23
第二章酶育牛黄与天然牛黄中二甲基亚砜提取成分的比较研究  23-39
  第一节酶育牛黄与天然牛黄HPLC指纹图谱比较研究  23-34
    1 仪器与试药  23-24
    2 方法与结果  24-33
    3 讨论  33-34
  第二节 HPLC法测定酶育牛黄与天然牛黄中胆红素含量  34-39
    1 仪器与试药  34
    2 方法与结果  34-37
    3 讨论  37-39
第三章酶育牛黄与天然牛黄中胆酸汁类成分的比较研究  39-57
  第一节酶育牛黄与天然牛黄HPLC-ELSD指纹图谱比较研究  39-48
    1 仪器与试药  39
    2 方法与结果  39-46
    3 讨论  46-48
  第二节 6种胆汁酸类成分的HPLC-ELSD测定法及在两种牛黄中的含量比较  48-57
    1 仪器与试药  48-49
    2 方法与结果  49-55
    3 讨论  55-57
第四章酶育牛黄与天然牛黄中微量元素的比较研究  57-63
  1 仪器与试药  57
  2 方法与结果  57-62
  3 讨论  62-63
第五章酶育牛黄与天然牛黄中胆固醇含量测定的比较研究  63-68
  1 仪器与试药  63
  2 方法与结果  63-66
  3 讨论  66-68
全文总结  68-70
参考文献  70-78
附录  78-86
攻读硕士期间发表的论文  86-87
致谢  87-88
学位论文评阅及答辩情况表  88

酶育牛黄与天然牛黄化学成分的比较研究

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