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一个特发性Brugada综合征心电图征家系的分子遗传学分析

作　者: 张浩
导　师: 曾和松
学　校: 华中科技大学
专　业: 内科学
关键词: Brugada 综合征 SCN5A 钠离子通道 DNA 测序分析基因突变无症状
分类号: R541.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 29次
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内容摘要

目的:研究一个湖北的Brugada心电图样改变的患者及其家系成员是否存在基因突变,若存在则分析其突变基因和可能的分子遗传学和电生理机制以及和临床表现心电图特征之间的关系。方法:收集家族成员的临床资料、心电图和血液标本。从外周血提取她们的白细胞DNA后进行连锁分析,根据连锁反应的结果筛选致病基因,针对可能性最大的致病基因SCN5A设计引物,依次经行聚合酶链反应扩增所有家族成员的28个外显子,琼脂糖凝胶电泳,回收PCR反应产物后进行BigDye单链扩增,纯化扩增产物,直接DNA测序,发现基因突变后应用限制性片段长度多态性技术(Restriction Fragment Length Polymorphism, RFLP),用限制性内切酶对含有和不含有突变的家族成员以及正常人的PCR产物经行酶切反应验证。并进行家系调查分析,分析遗传特点、突变的分布情况以及和心电图改变的关系。结果:心电图资料显示先证者存在2型Brugada波(马鞍型),其他3位家系成员的心电图分别提示混合型Brugada波和上抬的J波。连锁分析提示SCN5A这个基因的可能性最大。经过DNA测序发现先证者的SCN5A基因的第1001位密码子的第二个碱基处有一个“双峰”,经过数据库的查找发现这是一个错义突变T3002A,导致其所编码的Nav1.5离子通道α-亚单位的DII同源结构域的S5-S6跨膜节段之间的P环上的一个亮氨酸被谷氨酰胺取代(L1001P)。在此家族包括先证者及其3个兄弟姐妹和她的女儿在内共5人的DNA检测到了此突变。对家族所有成员和50个正常人的PCR产物的酶切分析提示正常人不存在此突变。同时在发现突变的家系成员中也发现了3个基因多态。结论:在中国的一个Brugada心电图样改变的家系发现了一个新的突变位点T3002A,家系中有五名成员检测出此杂合突变,连锁分析、基因测序、酶切反应的结果一致支持Brugada症状是常染色体显性遗传的特点。先证者及其家族成员均无晕厥、夜间濒死呼吸、室颤等临床症状,也无家族成员猝死史,先证者和其3个兄妹以及先证者的女儿仅有不典型的Brugada心电图样改变,但是在基因检测时,上述5人却均在SCN5A的第1001位密码子的第二个碱基处检测到一个杂合突变T3002A,提示可能是环境因素对突变位点导致的钠离子通道功能缺陷的一种修复现象,亦可能是由于基因多态对突变所致的Na+离子通道蛋白表达下降的负性消弱作用;第三种解释是尽管错义突变T3002A使SCN5A编码的蛋白的DII结构域的S5-S6之间的P环上的亮氨酸被谷氨酰胺取代,但是具体对其功能的影响程度有多大,则需要进行细胞功能的研究,比如突变的诱导,转染、膜片钳、动作电位等方面的研究,或许这个突变仅仅部分影响了Na离子通道的通透性和选择性,使钠通道在大多时刻仍然可以维持正常的生理功能,这也许就是先证者及其家属仅仅有心电图的不典型改变而没有任何临床症状的原因。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-10
1 引言  10-13
2 实验材料与方法  13-29
  2.1 关键步骤原理  13-14
  2.2 技术路线  14-15
  2.3 材料和仪器  15-17
  2.4 主要实验步骤  17-29
    2.4.1 DNA 的提取及纯度测定  17-20
    2.4.2 连锁分析  20-23
    2.4.3 突变检测  23-28
    2.4.4 突变验证  28-29
3 实验结果  29-38
  3.1 家系调查和临床特征  29-32
  3.2 连锁分析  32
  3.3 DNA 测序  32-36
  3.4 酶切分析  36-38
4 讨论  38-44
5 总结和展望  44-45
参考文献  45-56
综述  56-68
  参考文献  66-68
致谢  68

一个特发性Brugada综合征心电图征家系的分子遗传学分析

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