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建立人骨髓增生异常综合征细胞株SKM-1荷瘤小鼠模型

作　者: 田野
导　师: 刘文励
学　校: 华中科技大学
专　业: 血液内科
关键词: 骨髓增生异常综合征细胞株 SKM-1 动物模型
分类号: R551.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

【目的】探讨使用MDS细胞株 SKM-1来建立MDS荷瘤小鼠模型。【方法】我们常规培养MDS细胞株SKM-1细胞;取对数生长期的SKM-1细胞,以1×108/ml的细胞浓度进行接种。裸鼠(BALB/CA-nu/nu)分为3批,均为4周龄左右。第一批共10只裸鼠,每只接种0.1ml、约1.0×107个细胞于右肩胛皮下。第二批共15只裸鼠,接种细胞数量为每只0.2ml、约2.0×107个细胞于右肩胛皮下,每只裸鼠在注射细胞前24小时内接受400cGy的直线加速器全身照射,剂量率200cGy/min。无菌环境中解剖成瘤小鼠,取出皮下肿瘤,匀浆后培养。第三批裸鼠共15只。取对数生长期的肿瘤细胞,以1.0×108/ml的细胞浓度,每只接种0.2ml于4周龄左右的裸鼠右肩胛皮下,每只裸鼠仍然于注射细胞前24小时内接受400cGy的直线加速器全身照射。【结果】第一批裸鼠成瘤率为0(0/10),第二批裸鼠成瘤率约为13.3%左右(2/15),第三批裸鼠成瘤率约为53.3%左右(8/15)。皮下肿瘤成瘤率第三组明显高于第一组(P=0.005),也高于第二组(P=0.020)为了获得生物学性能稳定的动物模型,我们分析鉴定了荷瘤组织的来源及其生物学特性,结果:(1)组织病理学:HE染色显微镜下可见肿瘤中央有坏死组织,周围有炎性细胞浸润瘤细胞排列杂乱,不规则,核深染,核浆比例大,高倍镜下可见瘤细胞排列杂乱无章,核深染,核浆比大,可见核分裂相。(2)流式细胞术免疫学:荷瘤细胞表面免疫表型CD3、CD5、CD7、CD14均<1%,CD13:38.41%,HLA-DR:45.06%,与接种的人MDS细胞株SKM-1特性相符合。(3)荷瘤细胞染色体检测显示:分析荷瘤组织染色体发现与MDS细胞株SKM-1细胞染色体特性相符合,表现为多倍体、超三倍体多见,涉及多个染色体的缺失异常如del(1q)、del(1p)、del(2p)、del(4p)、del(5q)、del(6q),涉及9号染色体的异常der(9)add(q34)del(p21),涉及15号染色体异常如add(15p)等等,还有+1、+2、+3、+4、+5、+7、-8、+9、+10、+11、+13、-14、+15、+16、+17、+18、+21、+22等等染色体异常。而裸鼠染色体(2n=40)均为端着丝粒染色体,易与荷瘤细胞染色体区分。(4)免疫组织化学检测显示:肿瘤组织强表达突变型P53蛋白。经上述病理组织学、流式细胞免疫学,免疫组织化学,细胞遗传学等综合分析,证实荷瘤组织保持了SKM-1细胞系的生物学特征,来源为人源性的,与MDS细胞株SKM-1细胞特性相符合。【结论】成功的建立了用MDS细胞株SKM-1建立荷瘤小鼠模型,为进一步研究MDS的发病机制、筛选治疗MDS的药物以及探讨其药物的作用机制提供实验动物模型。

全文目录

中文摘要  5-7
Abstract  7-9
前言  9-10
材料与方法  10-16
结果  16-26
讨论与小结  26-28
参考文献  28-30
综述  30-44
  参考文献  39-44
致谢  44

建立人骨髓增生异常综合征细胞株SKM-1荷瘤小鼠模型

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