学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

腺病毒介导AQP1基因治疗涎腺干燥综合征的实验研究

作　者: 杨彦春
导　师: 杨军
学　校: 第三军医大学
专　业: 口腔临床医学
关键词: 水通道蛋白干燥综合征颌下腺腺病毒载体
分类号: R781.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
下　载: 106次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

干燥综合征(Sj?gren’s Syndrome,SS)是一种主要累及外分泌腺体的自身免疫性疾病。由于病变累及涎腺及泪腺,患者常感口、眼干燥、口腔粘膜灼热、味觉异常等不适,严重者可出现言语、咀嚼及吞咽困难,继发口腔溃疡等病变。在唾液腺的病理表现主要为淋巴细胞浸润,导致腺泡破坏。水通道蛋白(aquaporin,AQP)是近十年来发现的一族细胞跨膜蛋白。它们的发现从分子水平上揭示了水跨膜转运调节的基本机制。这些水通道具有快速和选择性促进水分的穿膜运动,达到渗透梯度的作用。在目前发现的10种AQP亚型中, AQP1、AQP2和AQP5在人类涎腺组织中有分布,与唾液的分泌过程密切相关,并在某些涎腺疾病及其病理过程中发挥了重要作用。作为第一个被鉴定的水通道蛋白,AQP1在机体的分布广泛,它选择性分布在那些与液体吸收或分泌有关的上皮细胞及协同水跨膜转运的内皮细胞中。AQP1在涎腺毛细血管、导管、腺泡上皮细胞中都有广泛分布,并参与了唾液的分泌。为了观察SS涎腺局部AQP1基因转移的治疗效果,我们选择重组腺病毒作为携带AQP1基因的载体。首先,应用高效细菌内同源重组系统,构建了携带AQP1基因的重组腺病毒载体。酶切pCHIPev载体和穿梭质粒pAdTrack-CMV,构建重组穿梭质粒,与腺病毒骨架质粒在BJ5183大肠杆菌中发生同源重组,脂质体介导共转染293细胞,重组腺病毒在其中复制、扩增。利用报告基因绿色荧光蛋白(GFP)可以在荧光显微镜下直接观察病毒的转染和感染效率。经反复“感染-收集-冻融”后,将感染后的293细胞裂解上清CsCl梯度超速离心纯化,测定重组腺病毒pAdEasy-1/AQP1滴度为1.2×1011pfu/ml。以MOI为100的pAdEasy-1/AQP1感染ECV-304细胞,48h后在荧光显微镜下计数表达GFP细胞百分率计算感染率是75%。本实验构建的腺病毒为下一步动物体内实验奠定了基础。建立小鼠SS动物模型,分别予以pAdEasy-1/AQP1、空病毒载体对照和生理盐水对照。观察各组小鼠饮水量、唾液流率的改变,Western blot分析各组小鼠颌下腺中AQP1表达量的变化。 <WP=8>实验结果表明:在SS小鼠颌下腺腺体破坏、腺泡萎缩变性、腺体分泌功能受到破坏的情况下,通过将AQP1基因腺病毒重组体转染到小鼠颌下腺可以有效提高唾液分泌,从而改善口干症状降低饮水量。空载体对照组与SS组在饮水量、唾液流率等方面无显著性差异说明腺病毒空载体转染对SS小鼠的唾液分泌无显著影响,说明AQP1基因腺病毒重组体对小鼠涎腺干燥综合征的治疗作用是通过其携带的AQP1基因发挥作用的。我们应用在本次实验中构建的AQP1基因重组腺病毒治疗小鼠涎腺干燥综合征并获得了较为明显的效果,为进一步的研究和应用提供了初步的实验基础。

全文目录

英文缩写词一览表  4-5
英文摘要  5-7
中文摘要  7-9
论文正文腺病毒介导AQP1基因治疗涎腺干燥综合征的实验研究  9-48
  前言  9-11
  第一部分 AQP1基因重组腺病毒的构建及鉴定  11-28
    材料和方法  11-16
    结果  16-19
    讨论  19-22
    参考文献  22-28
  第二部分 AQP1基因对小鼠涎腺干燥综合征的作用  28-46
    材料和方法  28-34
    结果  34-37
    讨论  37-39
    参考文献  39-46
  全文结论  46-47
  致谢  47-48
文献综述(一) 人类干燥综合征动物模型研究进展  48-53
  参考文献  51-53
文献综述(二) 涎腺基因治疗中腺病毒载体应用的研究进展  53-58
  参考文献  56-58
研究生期间发表论文  58

腺病毒介导AQP1基因治疗涎腺干燥综合征的实验研究

内容摘要

全文目录

相似论文