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双歧杆菌对新生鼠坏死性小肠结肠炎回肠形态学及iNOS、EGF基因表达的影响

作　者: 蒋国美
导　师: 陈运彬
学　校: 广州医学院
专　业: 儿科学
关键词: 双歧杆菌坏死性小肠结肠炎 iNOS EGF
分类号: R722.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:研究双歧杆菌对实验性新生鼠NEC模型回肠形态学的影响,同时,通过荧光定量PCR的方法检测回肠iNOS、EGF基因的表达,探讨补充双歧杆菌对肠道的保护作用是否与抑制iNOS的升高和EGF的下调有关,为应用双歧杆菌防治新生儿NEC提供分子生物学依据。方法:1、实验动物及分组:生后12小时内的新生鼠分3组,A组:实验组,13只,添加双歧杆菌并建立NEC模型;B组:模型组,13只,建立NEC模型;C组:空白对照组,13只,不添加任何益生菌,亦不建立NEC模型。2、双歧杆菌的添加方法:喂奶前临时在配方奶中加入双歧杆菌活菌,使配方奶中双歧杆菌的菌浓度为1*108cfu/ml,2次/日。3、建立NEC模型:对生后12小时内的新生鼠予部分配方奶喂养(4次/日),100%氮气缺氧90秒,4℃冷刺激10分钟,每天2次连续3天,在最后1次缺氧冷刺激后给予内毒素(LPS)20ul/只灌胃(浓度2.5mg/ml),建立新生鼠NEC模型。4、标本的制取:在建模结束后12小时(空白对照组在同一时间点),颈椎脱臼处死新生鼠,在距盲肠0.5cm处,剪取长约0.5cm的远端回肠置4%甲醛溶液中固定,为制作病理切片用;另再取约2cm回肠,迅速置-80℃冰箱为检测iNOS、EGF基因表达用。5、实验方法和检测指标:各组新生鼠建立NEC模型前后的体重变化;NEC模型建立过程中的死亡率;甲醛溶液固定过的回肠经石蜡包埋、H.E染色制成病理切片后,镜下观察各组新生鼠肠损伤评分及NEC的发生率;将-80℃保存的肠组织提取总RNA,然后逆转录成cDNA,采用荧光定量PCR方法检测iNOS、EGF基因在各组间表达的差异。6、统计学方法:采用SPSS13.0统计软件,计量资料以均值±标准差(?x±s)表示,组间比较采用方差分析或Kruskal-Wallis H检验,LSD-t检验或Nemenyi法检验;发生率间的比较采用χ2检验,P<0.05提示差异有统计学意义。。结果:1.B组建模结束后体重低于建模前水平[-(0.23±0.61)g],A组体重稍高于建模前水平[(0.41±0.59)g];C组整个实验期间体重增加满意[(2.45±0.34)g],各组间比较P<0.05,差异有统计学意义。2.A、B、C组建模过程中新生鼠死亡率分别为7.69%、15.38%和0,各组死亡率的比较P﹥0.05,差异无统计学意义。3.A、B、C组NEC的发生率为38.46%(5/13)、84.62%(11/13)和0(0/13),各组间比较,P<0.05,差异有统计学意义;A、B、C组肠损伤组织病理学评分(?x±s)分别为(1.50±0.52)、(2.35±0.41)、(0.27±0.37),各组间比较P<0.05,差异有统计学意义;。4.荧光定量PCR方法检测iNOS、EGF基因表达的结果显示,对iNOS:以C组为对照,iNOS在A、B两组均显著升高,A组是C组的2.74倍,B组是C组的12.46倍,P<0.05;A、B两组比较,A组表达较B组降低(P<0.05);对EGF:以C组为对照,EGF在A、B两组均有降低,但A组是C组的0.52倍,P<0.05,B组是C组的0.85倍,P>0.05;A、B两组比较,两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.生后早期的新生鼠可通过部分配方奶喂养、100%氮气缺氧、4℃冷刺激和灌服低浓度LPS模拟与人类相类似的实验性NEC动物模型;2.添加双歧杆菌可减轻因配方奶喂养、缺氧、冷刺激和灌服LPS引起的体重减轻。3.添加双歧杆菌可降低实验性新生鼠NEC的发生率和肠损伤的严重程度。4.新生鼠NEC时其回肠iNOS的基因表达增加;双歧杆菌可能通过抑制iNOS的激活,减轻了肠道粘膜的损害,从而降低了NEC的发生率及其严重程度。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-9
中英文词汇对照表  9-11
前言  11-14
  技术路线  13-14
第一部分  14-31
  材料和方法  15-21
  结果  21-26
  讨论  26-30
  结论  30-31
第二部分  31-46
  材料和方法  32-38
  结果  38-41
  讨论  41-45
  结论  45-46
结束语  46-47
参考文献  47-53
附录  53-61
综述  61-67
  参考文献  64-67
致谢  67-68

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