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目的观察急性坏死性胰腺炎大鼠肠黏膜损伤NF-κB、HMGB1时点表达规律,探讨急性坏死性胰腺炎大鼠NF-κB、HMGB1与肠黏膜损伤的相关性。方法健康SD大鼠n=70,随机(抽签法)分为两组：ANP组(实验组,A组),n=40；SO组(假手术组,S组),n=30。A组和S组再分别按3h、6h、12h、24h、36h时点随机均等分成5个亚组,A组各亚组大鼠n=8,S组各亚组大鼠n=6。A组大鼠行逆行胰胆管匀速泵入5%牛磺胆酸钠(0.1ml/100g,0.2ml/min)建立ANP模型,S组大鼠开腹仅翻动十二指肠。两组大鼠均在建模后继续禁饮、禁食,皮下注射5%葡萄糖氯化钠补液(2ml/100g),每6h重复补液一次。两组大鼠均在建模后3h、6h、12h、24h、36h时点开腹,观察腹腔大体情况,门静脉取血检测血AMY、血Ca2+、DAO浓度,ELISA法和免疫组化法检测小肠黏膜NF-KBp65和HMGB1的表达,取小肠和胰腺组织行HE染色并进行组织病理学评分。结果(1)腹腔大体观察：A组大鼠随时点延迟出现胰腺点片状出血、坏死,大片皂化斑,血性、淡红色腹水,胃肠胀气、扩张；S组各时点均未见上述改变。(2)血AMY：A、S组大鼠比较：A组大鼠各时点血AMY浓度均高于S组各时点,P<0.05。A组大鼠组间各时点比较：①A3h低于A6h、Al2h、A24h、A36h,P<0.05；②A6h低于Al2h、A36h,P>0.05,A6h低于A24h,P＜0.05；③Al2h低于A24h、A36h,P>0.05；④A24h高于A36h,P＜0.05。S组大鼠组间各时点比较,无显著性差异,P>0.05。(3)血Ca2+：A、S组大鼠比较：A组大鼠各时点血Ca2+浓度均低于S组各时点,P<0.05。A组大鼠组间各时点比较：①A3h高于A6h、A12h、A24h、A36h,P＜0.05；②A6h高于Al2h、A24h、A36h,P＜0.05；③Al2h低于A24h、A36h,P>0.05；④A24h高于A36h, P>0.05。S组大鼠组间各时点比较,无显著性差异,P＞0.05。(4)胰腺组织病理学检查(HE染色)：A组大鼠：①A3h：胰腺组织轻度水肿,腺泡细胞轻度肿胀,点状出血,少量炎症细胞浸润,腺叶结构正常；②A6h：胰腺组织中度水肿,腺泡细胞肿胀明显,片状出血,较多炎症细胞浸润,腺叶结构轮廓尚清晰；③Al2h：胰腺组织水肿明显,腺泡细胞肿胀明显,片状出血及少量坏死,大量炎症细胞浸润,部分腺叶正常结构消失；④A24h：胰腺组织水肿、出血及坏死明显,大量炎症细胞浸润,大部分腺叶正常结构消失；⑤A36h：胰腺组织大部分出血及坏死,大量炎症细胞浸润,腺叶正常结构基本消失。S组大鼠：胰腺组织未见上述病理改变。(5)小肠组织病理学检查(HE染色)：A组大鼠：①A3h：肠绒毛排列整齐,轻度水肿,无顶部上皮细胞脱落,肠上皮下间隙正常,少量炎性细胞浸润；②A6h：肠绒毛中度水肿,顶部上皮细胞一部分脱落,肠上皮下间隙扩大,较多炎性细胞浸润；③A12h：肠绒毛排列不整齐,水肿明显,顶部上皮细胞部分脱落,肠上皮下间隙扩大,大量炎性细胞浸润；④A24h：肠绒毛顶部上皮细胞大量坏死脱落,肠上皮下间隙明显扩大,大量炎性细胞侵润；⑤A36h：肠绒毛变短,排列不规则并两两融合,顶部上皮细胞大量坏死脱落、局灶性溃疡,肠上皮下间隙明显扩大,大量炎性细胞浸润。S组大鼠：小肠组织未见上述病理改变。(6)胰腺组织病理学评分：A、S组大鼠比较：A组大鼠各时点评分均高于S组相应时点,P＜0.05。A组大鼠组间各时点比较：①A3h低于A6h、Al2h、A24h、A36h,P＜0.05；②A6h低于Al2h、A24h、A36h,P＜0.05：③Al2h低于A24h、A36h,P＜0.05；④A24h低于A36h,P＜0.05。S组大鼠组间各时点比较,无显著性差异,P>0.05。(7)小肠组织病理学评分：A、S组大鼠比较：①A3h高于S3h,P＞0.05；②A6h、Al2h、A24h、A36h均高于S组相应各时点,P＜0.05。A组大鼠组间各时点比较：①A3h低于A6h、Al2h、A24h、A36h,P＜0.05；②A6h低于Al2h、A24h、A36h,P＜0.05；③Al2h低于A24h、A36h,P＜0.05；④A24h低于A36h,P＞0.05。S组大鼠组间各时点比较,无显著性差异,P＞0.05。(8)肠黏膜细胞NF-κBp65表达：A、S组大鼠比较：A3h、A6h、Al2h NF-κBp65表达均高于S组同时点,P<0.05；A24h、A36h亦高于S组同时点,P＞0.05。A组大鼠组间各时点比较：①A3h高于A6h、Al2h、A24h、A36h,P＜0.05；②A6h高于Al2h、A24h、A36h,P＜0.05；③Al2h高于A24h、A36h,P＜0.05；④A24h低于A36h,P＞0.05。S组大鼠组间各时点比较,无显著性差异,P＞0.05。(9)肠黏膜细胞HMGB1表达：A、S组大鼠比较：A3h高于S3h,P>0.05；A6h、A12h、A24h、A36h均高于S组同时点,P<0.05。A组大鼠组间各时点比较：①A3h低于A6h、A12h、A24h、A36h,P<0.05；②A6h低于A12h,P>0.05,A6h低于A24h、A36h,P<0.05；③A12h低于A24h、A36h,P<0.05；④A24h低于A36h,P>0.05。S组大鼠组间各时点比较,无显著性差异,P>0.05。(10)小肠组织NF-κBp65浓度：A、S组大鼠比较：A3h、A6h、A12h均高于S组同时点,P<0.05；A24h、A36h均高于S组同时点,P>0.05。A组大鼠组间各时点比较：①A3h高于A6h、A12h、A24h、A36h,P＜0.05；②A6h高于A12h、A24h、A36h,P＜0.05；③A12h高于A24h、A36h,P＜0.05；④A24h高于A36hP>0.05。S组大鼠组间各时点比较,无显著性差异,P>0.05。(11)小肠组织HMGB1浓度：A、S组大鼠比较：A3h高于S3h,P>0.05；A6h、A12h、A24h、A36h均高于S组同时点,P<0.05。A组大鼠组间各时点比较：①A3h低于A6h、A12h、A24h、A36h,P＜0.05；②A6h低于A12h,P>0.05,A6h低于A24h、A36h,P＜0.05；③A12h低于A24h、A36h,P<0.05；④A24h高于A36h,P＞0.05。S组大鼠组间各时点比较,无显著性差异,P>0.05。(12)血DAO浓度：A、S组大鼠比较：A3h高于S3h,P>0.05；A6h、A12h、A24h、A36h均高于S组同时点,P＜0.05。A组大鼠组间各时点比较：①A3h低于A6h、A12h、A24h、A36h,P＜0.05；②A6h低于A12h,P>0.05,A6h低于A24h、A36h,P<0.05；③A12h低于A24h、A36h,P＜0.05；④A24h低于A36h,P>0.05。S组大鼠组间各时点比较,无显著性差异,P>0.05。(13)相关性分析：①A组大鼠胰腺组织病理学评分与小肠组织病理学评分呈正相关关系,r=0.866,P<0.05。②A组大鼠小肠组织NF-κBp65浓度与小肠组织病理学评分呈负相关关系,r=-0.893,P<0.05。③A组大鼠小肠组织HMGB1浓度与小肠组织病理学评分呈正相关关系, r=0.798, P<0.05。④A组大鼠血浆DAO浓度与小肠组织病理学评分呈正相关关系, r=0.78, P<0.05。⑤A组大鼠血浆DAO浓度与小肠组织NF-κBp65浓度呈负相关关系,r=-0.795,P<0.05。⑥A组大鼠血浆DAO浓度与小肠组织HMGB1浓度呈正相关关系,r=0.870,P＜0.05。结论(1)ANP大鼠成模后6h出现肠黏膜损伤。(2)ANP大鼠成模后3h肠黏膜NF-κB表达最高,随时点延长逐渐下降,与血浆DAO浓度、小肠组织病理学评分呈负相关关系。(3)ANP大鼠成模后6h肠黏膜HMGB1表达升高,随时点延长逐渐增高,与血浆DAO浓度、小肠组织病理学评分呈正相关关系。(4)HMGB1介导了ANP大鼠肠黏膜损伤。
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