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缺氧诱导的星形胶质细胞源性血管内皮生长因子对共培养的脑微血管内皮细胞的影响

作　者: 周欣
导　师: 段耀奎
学　校: 泰山医学院
专　业: 神经生物学
关键词: 星形胶质细胞脑微血管内皮细胞血管内皮细胞生长因子共培养
分类号: R741
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

目的建立星形胶质细胞与脑微血管内皮细胞共培养模型,研究星形胶质细胞源性VEGF对脑微血管内皮细胞的影响。方法(1)分离纯化Wistar大鼠大脑皮质星形胶质细胞(astrocyte, Ast)和脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cell, BMEC)。GFAP抗体免疫荧光和第八因子相关抗原(ⅧF-Ag)免疫荧光分别鉴定。(2)纯化的星形胶质细胞置于缺氧环境培养30min后复氧,RT-PCR检测星形胶质细胞中VEGFmRNA的表达,并与正常培养的星形胶质细胞作对照。(3)利用Transwell建立体外星形胶质细胞、脑微血管内皮细胞共培养模型,观察星形胶质细胞源性VEGF对脑微血管内皮细胞迁移及LDH漏出率的影响。结果(1)获得了纯度分别是95%、90%的星形胶质细胞和脑微血管内皮细胞,符合实验要求。(2)正常培养的脑皮质星形胶质细胞有VEGF表达,但表达率较低。(3)缺氧／复氧后VEGFmRNA的表达增强,呈时间依赖性,8h达高峰,与对照组相比有显著差别(P<0.01),随后逐渐降低。(4)星形胶质细胞源性VEGF可促使脑微血管内皮细胞发生迁移并增加其LDH的漏出率,此作用可被sFlt终止。结论慢性缺血性脑血管疾病常会伴随着血管新生,并受血管内皮生长因子(V ascular endothelial growth factor VEGF)调节。我们的研究显示：缺氧可明显诱导脑皮质星形胶质细胞表达VEGF。由于星形胶质细胞在神经元和脑微血管内皮细胞之间起着桥梁作用,一方面星形胶质细胞可通过足突作用于脑微血管内皮细胞上的VEGF受体,使脑微血管内皮细胞增生、迁移,微血管数量增加；另一方面,星形胶质细胞可将VEGF释放到细胞外间隙,直接作用于神经元,发挥神经营养因子作用。同时,我们的结果也显示VEGF能够增加脑微血管内皮细胞的LDH的漏出率,提示VEGF可增强微血管的通透性,导致脑水肿的发生。

全文目录

摘要  3-4
ABSTRACT  4-6
缩略词表  6-7
引言  7-8
第一部分:星形胶质细胞和脑微血管内皮细胞分离与培养  8-28
  前言  8-9
  材料和方法  9-13
  结果  13-20
  讨论  20-24
  结论  24-25
  参考文献  25-28
第二部分:星形胶质细胞源性VEGF对脑微血管内皮细胞的影响  28-52
  前言  28-29
  材料和方法  29-36
  结果  36-42
  讨论  42-47
  结论  47-48
  参考文献  48-52
综述  52-73
  参考文献  64-73
附录  73-74
  攻读硕士学位期间完成和发表的论文  73
  攻读硕士学位期间参与的主要科研项目  73-74
致谢  74-75

缺氧诱导的星形胶质细胞源性血管内皮生长因子对共培养的脑微血管内皮细胞的影响

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