学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

四种抑癌基因p16、RASSF1A、CDH1、CDH13的甲基化状态及甲基转移酶活性和转录与肺癌的相关性研究

作　者: 赵莹
导　师: 孙丽华
学　校: 南京医科大学
专　业: 呼吸内科学
关键词: 肺癌 抑癌基因 甲基化 甲基化转移酶
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 74次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的1、研究四种抑癌基因(p16、RASSF1A、CDH1、CDH13)甲基化在肺癌诊断中的意义;2、在肺癌细胞株中检测DNMTs与抑癌基因甲基化状态的关系,观察去甲基化处理后,四种抑癌基因的转录水平及肺癌细胞生长增殖的变化。方法1、筛选77例疑诊肺癌患者为研究对象,根据支气管镜检查及相关检查结果,将77例实验对象分为三组:第一组:肺癌组;第二组:良性肺病组;第三组:需定期随访组。收集支气管肺泡灌洗液(BALF)标本,采用MSP(Methylation-specific PCR)法分别检测BALF中p16、RASSF1A、CDH1、CDH13的甲基化状态;2、采用5-Aza-CdR去甲基化处理A549肺癌细胞株,MSP法检测去甲基化前后四种抑癌基因的甲基化状态变化。半定量RT-PCR检测癌细胞株DNMT1、DNMT3b、p16、RASSF1A、CDH13、CDH1的mRNA转录水平变化;酶活性连续循环比色法检测DNMTs的催化活性;流式细胞术(FCM)及MTT法检测癌细胞的生长状态。结果1、BALF中肺癌组47例,p16、RASSF1A、CDH1、CDH13的甲基化阳性率分别为32%、40%、32%、28%。良性肺病13例,上述四种基因甲基化阳性率分别为0%、8%、0%、8%。肺癌组p16、RASSF1A、CDH13三种甲基化阳性率大于良性肺病组(P<0.05)。47例肺癌患者中四种基因甲基化率在鳞癌和腺癌中均无统计学意义(P>0.05)。随访组中p16、RASSF1A、CDH1、CDH13的甲基化阳性率分别为18%、12%、12%、12%,p16、CDH1、CDH13在肺癌组和随访组之间差异无统计学意义(P>0.05) ;2、肺癌组四种抑癌基因中至少一个发生甲基化的百分比为79%。任意三个抑癌基因的组合,至少一个阳性的百分比分别为62%、72%、68%、72%。三基因组合与四基因组合的阳性率差别无统计学意义(P>0.05);RASSF1A、CDH1组合至少一个基因发生甲基化的阳性率62%,与四基因组合甲基化阳性率也没有统计学意义(P>0.05)应用四基因联合诊断肺癌的敏感性为79%,特异性为85%;3、A549细胞株中去甲基化处理后,在A549细胞株中完全甲基化的抑癌基因CDH13发生部分去甲基化,mRNA转录水平前后分别为:p16(0.31±0.13; 0.37±0.10),RASSF1A(0.14±0.06; 0.47±0.13),CDH1(0.22±0.11; 0.36±0.14),CDH13(0.36±0.16; 0.54±0.15)。CDH13、RASSF1A、CDH1的mRNA转录水平增高(P<0.05),p16基因的mRNA转录增加无统计学意义(P>0.05);4、5-Aza-CdR处理前后DNMTs的转录水平分别为: DNMT1(1.23±0.253 ,1.15±0.166)、DNMT3b (0.760±0.164, 0.649±0.181) ,两组无统计学差异(P>0.05)。去甲基处理组DNMTs催化活性下降,处理前后DNMT1(0.195±0.030, 0.153±0.041)、DNMT3b(0.172±0.029, 0.116±0.050)(P<0.05)。FCM结果提示细胞周期阻滞于G1/G0,两组凋亡率分别为0.62±0.56, 7.60±1.92,凋亡率明显增加(P<0.01)。MTT结果示去甲基化组细胞生长受抑制。结论本研究中BALF的p16、RASSF1A、CDH1、CDH13甲基化状态与肺癌的发生相关;四种抑癌基因中任意三种基因的甲基化状态测定,在肺癌诊断中具有良好的特异性和敏感性;5-Aza-CdR去甲基化处理A549肺癌细胞株后,DNMT1及DNMT3b活性下降,其转录水平不受影响;RASSF1A、CDH1、CDH13的转录水平增高,p16的转录无明显变化。去甲基化处理导致A549细胞增殖受抑,凋亡率增加。

全文目录


英语缩略词说明  4-6
中文摘要  6-9
英文摘要  9-12
前言  12-16
实验材料  16-18
实验方法步骤及结果  18-44
  实验一 支气管肺泡灌洗液中p16、RASSF1A、CDH1、CDH13 甲基化水平检测  18-32
  实验二 A549 肺癌细胞株去甲基化前后甲基转移酶转录、活性和p16、RASSF1A、CDH1、CDH13 甲基化水平检测  32-44
讨论  44-49
小结  49-50
参考文献  50-56
综述及参考文献  56-68
  参考文献  62-68
攻读硕士学位期间发表论文情况  68-69
致谢  69

相似论文

  1. 钯催化的烯烃双官能团化和吲哚三氟甲基化反应研究,O643.32
  2. 125I粒子植入对晚期肺癌治疗效果的临床研究,R734.2
  3. 豆梨组织培养过程中玻璃化形成机制及其恢复技术研究,S661.2
  4. 牛SYCP3基因的克隆、表达与启动子区甲基化分析,S823
  5. 鸡奇异变形杆菌和沙门菌16S rRNA甲基化酶基因的检测及扩散机制,S858.31
  6. 5-Aza-dC对肺癌SPC-A-1细胞p16、MGMT基因甲基化及其表达的影响,R734.2
  7. 肺癌患者癌组织和血浆p16基因甲基化的检测及去甲基化肺癌细胞生物学行为和p16基因转录的研究,R734.2
  8. 联合检测血清TPS，CEA，CYFRA21-1，NSE在肺癌诊断中的临床价值,R734.2
  9. 非小细胞肺癌组织中金属硫蛋白及基质金属蛋白酶-2的表达及相关性研究,R734.2
  10. 镉胁迫诱导拟南芥MLH1基因启动子甲基化变化的分子诊断,X173
  11. 肿瘤标志物联合检测在肺癌诊断及疗效判断中的临床意义,R734.2
  12. SO2胁迫对拟南芥DNA甲基化多态性的影响,Q943
  13. 组蛋白特定甲基化位点突变对完整及第二结构域缺失的ELP3转录功能的影响,Q75
  14. 解氏肺癌二号方对小鼠Lewis肺癌伴胸水治疗价值的研究,R734.2
  15. 趋化因子受体CCR5在非小细胞肺癌中的表达及意义,R734.2
  16. 顺铂对小鼠肺癌细胞中P-糖蛋白表达的影响,R734.2
  17. 无血清培养联合顺铂富集人肺癌干细胞的体外基础研究,R734.2
  18. NF-κB抑制剂PDTC与顺铂对小鼠Lewis肺癌NF-κB和ASPP2表达的影响,R734.2
  19. 非小细胞肺癌术后辅助化疗联合恩度靶向治疗的分子生物学研究,R734.2
  20. 新城疫病毒对晚期非小细胞肺癌化疗的增强作用,R734.2
  21. ERCC1/RRM1的表达与Ⅰ-ⅢA期非小细胞肺癌术后生存期及与铂类耐药的相关性,R734.2

中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 呼吸系肿瘤 > 肺肿瘤
© 2012 www.xueweilunwen.com