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乙二醛酶I基因Ala111Glu多态性与糖尿病合并冠心病的关系以及人血浆丙酮醛的高效液相色谱测定方法的建立

作　者: 金勋
导　师: 鄢盛恺；宋耀虹
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: 乙二醛酶I 丙酮醛 糖尿病 冠心病基 因多态性 高效液相色谱法
分类号: R541.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 84次
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内容摘要


研究论文一乙二醛酶Ⅰ基因Ala111Glu多态性与糖尿病合并冠心病的关系背景和目的乙二醛酶Ⅰ（GLO-Ⅰ）是丙酮醛（MG）的生理解毒酶系统——乙二醛酶系统重要组分之一,能将具有糖基化毒性和致突变性的MG转化为无毒的乳酸盐而排除体外。研究显示,编码GLO-Ⅰ基因的第4外显子具有Ala111Glu基因多态性,此突变所对应的氨基酸位点与GLO-Ⅰ的功能区中的Glu99位点在3D结构上接近,且此单核苷酸多态性（SNP）能对GLO-Ⅰ的酶活性产生一定的影响。本研究旨在探讨我国北方地区汉族人GLO-Ⅰ基因的Ala111Glu多态性对脂代谢、糖代谢的影响,及其与冠心病、糖尿病和糖尿病合并冠心病的关系,为糖尿病及其合并症的筛查与防治提供依据。对象与方法研究对象均为我国北方地区汉族人群,包括161例健康人对照组、99例2型糖尿病患者（DM组）、102例冠心病患者（CHD组）和71例糖尿病合并冠心病的患者（DM+CHD组）。采用改良碘化钠法提取基因组DNA,聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）法分析GLO-Ⅰ基因的Ala111Glu多态性。高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）采用直接匀相法测定;血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）采用酶法测定;血糖（GLU）采用葡萄糖氧化酶法测定;糖化血红蛋白（HbAlc）采用低压层析法测定,血清尿素氮（BUN）采用酶法测定,肌酐（Cr）采用苦味酸法测定,尿酸采用尿酸酶法测定。SPSS11.0统计软件进行统计学分析。结果1.糖尿病组、冠心病组及糖尿病合并冠心病组血清BUN、TC、TG和LDL-C水平明显高于对照组,血清HDL-C水平明显低于对照组。2.我国北方地区汉族人群GLO-Ⅰ基因Ala111Glu多态性等位基因频率C、A分别为0.103、0.897。等位基因的频率分布与阿拉斯加人、南欧人、东欧人、南美人、非洲人、中东人和印度人存在差异。3.对照组、DM组、CHD组和DM+CHD组的GLO-Ⅰ基因Ala111Glu多态性的基因型频率分布与性别、高血压家族史和体重指数等无明显相关。4.GLO-Ⅰ基因Ala111Glu多态性与HbAlc及血清BUN、Cr、TC、TG、HDL-C和LDL-C水平无明显相关。5.不同组GLO-Ⅰ基因Ala111Glu多态性的基因型与等位基因频率分布无差异,该SNP不是糖尿病合并冠心病发生的危险因素。6.Logistc回归分析显示,本研究对象患糖尿病合并冠心病的性别,年龄和HbAlc水平与其他各组存在显著差异,年龄、性别（男性）和HbAlc的P值和OR值分别是P＜0.05、OR=1.106;P=0.006、OR=5.636和P=0.046、OR=1.132.性别、年龄和高HbAlc水平是糖尿病合并冠心病的危险因素。结论本研究建立了碘化钠法快速提取基因组DNA,PCR-RFLP法分析GLO-Ⅰ基因Ala111Glu多态性的方法。该方法简便快捷,易于操作,非常适合大规模流行病学调查和临床实验室采用。性别、年龄和高HbAlc水平是糖尿病合并冠心病的危险因素。GLO-Ⅰ基因Ala111Glu多态性与HbAlc及血清BUN、Cr、TC、TG、HDL-C和LDL-C水平无明显相关。不同研究对象之间GLO-Ⅰ基因Ala111Glu多态性的基因型与等位基因频率分布无差异,该SNP不是糖尿病合并冠心病发生的危险因素。研究目的目的建立应用高效液相色谱（HPLC）紫外检测的方法测定人血浆中丙酮醛的浓度的方法。材料和方法材料固定相:Waters C18色谱柱（3.9mmID×150mm,4μm）;流动相:10mM磷酸缓冲液,pH=4.5,含35%乙腈;流速:1ml/min;紫外检测波长:315nm。方法取EDTA-K3抗凝血,3000rpm离心10min后,取血浆上清液200μl,加入5N的高氯酸（PCA）进行去蛋白质处理后,加入75.6μmol/L的内标准品5-甲基喹喔啉（5-MQ）50μl,以及100mmol/L的衍生化试剂邻苯二氨（o-PD）,室温下衍生化3～4h后取上清液15μl进行分析。结果在本方法条件下,人血浆中MG的浓度在0.02～10.00μmol/L范围内具有良好的线性,线性方程为:峰面积比=0.1509CMG+0.0166,R2=0.9926,高、低浓度质控样本的批内变异的CV值分别是6.49%和7.70%,批间变异的CV值分别是6.26%和4.16%,方法学回收率在99.56%～109.87%之间,本方法最低检测限度为0.02μmol/L。结论采用HPLC-UV检测人血浆中MG浓度的方法简便,灵敏度高,结果准确可靠,为临床实验室进一步研究MG提供了方法学基础。

全文目录


英文缩写  4-7
研究论文一 乙二醛酶I基因Ala111Glu多态性与糖尿病合并冠心病的关系  7-56
  中文摘要  7-10
  英文摘要  10-13
  前言  13-16
  材料和方法  16-28
  结果  28-46
  讨论  46-52
  结论  52-53
  参考文献  53-56
研究论文二 人血浆丙酮醛的高效液相色谱测定方法的建立  56-76
  中文摘要  56-58
  英文摘要  58-60
  前言  60-62
  材料和方法  62-65
  结果  65-70
  讨论和结论  70-73
  参考文献  73-76
文献综述  76-96
  参考文献  88-96
致谢  96

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 心脏、血管（循环系）疾病 > 心脏疾病 > 冠状动脉（粥样）硬化性心脏病（冠心病）
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