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新型凝胶蛋白质电转移装置的研究初探

作　者: 张浩波
导　师: 包建民
学　校: 天津大学
专　业: 药物分析
关键词: 二维凝胶电泳 凝胶蛋白质转移 垂直毛细管电泳
分类号: Q51-3
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 37次
引　用: 1次
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内容摘要


随着包括人类在内的几十种生物体基因组测序的完成,生命科学的研究重点转移到了后基因组时代的重要组成部分-蛋白质组学。目前在蛋白质组研究中将应用最多的分离技术-二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)和日益普及的生物质谱鉴定技术相连接是当前蛋白质组学研究的核心技术。一种较新的转移技术是毛细管电泳转移,相比其它连接技术此方法在转移时间和转移装置的通用性上获得很大的突破。本论文建立了一种新型的凝胶蛋白质转移装置,力求实现垂直方向上的蛋白质电提取和电排出转移。在凝胶蛋白质毛细管转移的基础上加入了两处改动:1.使用未涂层的熔融石英毛细管和添加了阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵的缓冲液,产生反向电渗流;2.在毛细管与凝胶的接触端引入一电极,形成三电极控制的凝胶蛋白质电转移。通过实验室前期的工作及后续改进实验,验证了改动后的凝胶蛋白质电转移是可行的,并对一些相关因素进行了考察。在垂直蛋白质电转移单元的研究中,通过预试验和以蛋白质溶液及凝胶为转移样品的电转移离线检测实验,阶段性的分别验证了反向电渗流对抗重力将下端溶液提升至上端槽的可行性、新装置在转移过程中的三电极可操作性以及自制的垂直毛细管电转移装置对凝胶中蛋白质的电转移可行性。用毛细管电泳紫外检测作为离线检测手段来模拟质谱,在检测灵敏度较低的情况下,仍然取得了一定的初步研究成果。垂直方向上的电泳转移大大缩短了从凝胶蛋白质到后续检测的连接时间;三电极的设计使得凝胶中蛋白质的提取和之后的转移排出更容易实现和控制;转移单元制作简单,成本低廉,也是实现自动化的有利条件。因此,这一模型装置为凝胶蛋白质转移自动化和二维凝胶电泳与MADLI-MS的快速连接提供了新的选择。

全文目录


摘要  3-4
ABSTRACT  4-7
第一章 文献综述  7-23
  1.1 蛋白质组及蛋白质组学  7-8
  1.2 蛋白质组学研究的主要技术  8-15
    1.2.1 二维凝胶电泳  9-11
    1.2.2 生物质谱技术  11-15
  1.3 连接二维凝胶电泳和质谱的方法  15-19
    1.3.1 传统提取方法  15-16
    1.3.2 蛋白质点的电洗脱转移  16-17
    1.3.3 蛋白质点的印迹转移  17-19
  1.4 毛细管电转移  19-21
    1.4.1 毛细管电泳  19-20
    1.4.2 凝胶蛋白质毛细管萃取技术  20-21
  1.5 本论文研究内容  21-23
第二章 基础实验条件优化  23-28
  2.1 凝胶蛋白质转移平台的改进  23-24
    2.1.1 凝胶蛋白质转移平台的制作  23-24
    2.1.2 电极改进  24
  2.2 模拟胶的配制方法改进  24-25
  2.3 SDS-PAGE 后凝胶处理方法的选择  25-26
  2.4 检测波长的确定  26
  2.5 小结  26-28
第三章 常规（水平）凝胶蛋白质毛细管电转移  28-42
  3.1 实验部分  28-34
    3.1.1 仪器与试剂  28-29
    3.1.2 凝胶蛋白质电转移试验装置及毛细管电泳实验条件  29-30
    3.1.3 试液配制  30-31
    3.1.4 模拟胶的配制及SDS-PAGE 的实验步骤  31-33
    3.1.5 凝胶蛋白质毛细管电转移实验步骤  33-34
  3.2 结果与讨论  34-41
    3.2.1 模拟胶中蛋白质的提取转移实验  34-38
    3.2.2 SDS-PAGE 后凝胶中蛋白质的提取转移实验  38-41
  3.3 小结  41-42
第四章 新型（垂直）凝胶蛋白质电转移装置研究初探  42-53
  4.1 实验部分  42-47
    4.1.1 仪器与试剂  42-43
    4.1.2 垂直毛细管电转移试验装置及毛细管电泳检测试验条件  43-44
    4.1.3 试液配制  44-45
    4.1.4 模拟胶的配制  45
    4.1.5 竖直毛细管电转移装置预试验实验步骤  45-46
    4.1.6 蛋白质溶液为样品的竖直毛细管电转移实验  46
    4.1.7 凝胶蛋白质样品的竖直毛细管电转移实验  46-47
  4.2 结果与讨论  47-52
    4.2.1 预试验  47
    4.2.2 蛋白质溶液为样品的竖直毛细管电转移实验  47-50
    4.2.3 凝胶蛋白质样品的竖直毛细管电转移实验  50-52
  4.3 小结  52-53
第五章 结论与展望  53-55
  5.1 结论  53
  5.2 展望  53-55
参考文献  55-59
发表论文和参加科研情况说明  59-60
致谢  60

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中图分类: > 生物科学 > 生物化学 > 蛋白质
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