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非光敏中药组方外用治疗白癜风有效的机制研究

作　者: 阮高波
导　师: 许爱娥
学　校: 浙江中医药大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 中草药 非光敏 大鼠 小鼠B16黑素瘤细胞 白癜风
分类号: R275
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要


目的通过动物实验,探讨女贞子、黑胡椒等组成的非光敏中药组方(中药2号:女贞子、黑胡椒、浮萍、透骨草、乌蕨)外用治疗白癜风有效的可能机制;通过细胞实验,进一步研究酪醇和胡椒碱——分别为女贞子和黑胡椒的重要单体,影响黑素合成的可能分子机制。方法(1)动物实验:中药2号乙醇提取液外搽大鼠背部皮肤,并以75%乙醇外搽作为阴性对照,4周后取组织活检;采用免疫组化检测大鼠表皮中S100、干细胞因子受体(c-KIT)和蛋白酶激活受体-2(PAR-2)表达量的变化。(2)细胞实验:中药单体酪醇和胡椒碱作用于小鼠B16黑素瘤细胞48或72小时,并以相应溶媒作为对照;采用MTT法测定细胞增殖,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,氢氧化钠裂解法测定黑素含量,免疫组化法检测c-KIT和酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)蛋白的表达。结果(1)与75%乙醇外搽相比,中药2号外搽后S100阳性细胞数无显著性差异(P＞0.05);c-KIT、PAR-2阳性细胞数均有增加,差异有显著性(P＜0.05)。(2)浓度为25μg/mL的酪醇作用后,B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性、黑素合成能力均增强(P＜0.05),c-KIT和TRP-2蛋白表达量分别比空白对照组增加9.50%(P＜0.05)和9.16%(P＜0.01);浓度为12.5μg/mL的胡椒碱对B16黑素瘤细胞增殖(P＜0.05)、酪氨酸酶活性(P＜0.01)、黑素合成(P＜0.05)均有促进作用,c-KIT和TRP-2蛋白表达量分别比空白对照组增加8.81%和10.58%(P＜0.05)。结论(1)非光敏中药组方——中药2号外搽治疗白癜风有效的机理可能与促进细胞移行、黑素转运有关。(2)酪醇和胡椒碱均能促进小鼠B16黑素瘤细胞的黑素合成,胡椒碱具有促进细胞增殖的作用;其机制可能部分通过上调酪氨酸酶活性和c-KIT、TRP-2蛋白表达而发挥作用。(3)本实验为白癜风治疗外用中药组方开辟新的思路,为临床选药提供了更多的实验依据。

全文目录


中文摘要  6-7
ABSTRACT  7-9
前言  9-11
第一部分 外搽非光敏中药组方对大鼠表皮c-KIT和PAR-2蛋白表达的促进作用  11-23
  一、材料与方法  11-15
    (一) 实验材料  11-12
      1、实验药物  11
      2、实验动物  11
      3、主要试剂  11
      4、主要仪器  11-12
    (二) 实验方法  12-14
      1、中药制备  12
      2、动物给药  12
      3、免疫组化染色  12-14
      4、结果判定  14
    (三) 统计学处理  14-15
  二、实验结果  15-16
  三、分析与讨论  16-21
    (一) 白癜风病理及复色途径  16-17
    (二) 白癜风发病的可能分子机制  17-18
    (三) 非光敏中药组方中药2号的临床疗效  18
    (四) 非光敏中药组方中药2号的组方依据  18-19
    (五) 非光敏中药组方中药2号组方的实验室基础  19-20
    (六) 本实验结果探讨  20-21
  四、小结  21-23
第二部分 酪醇和胡椒碱对小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成及c-KIT、TRP-2蛋白表达的促进作用  23-34
  一、材料与方法  23-26
    (一) 实验材料  23-24
      1、实验药物  23
      2、实验细胞  23
      3、主要试剂  23
      4、主要仪器  23-24
    (二) 实验方法  24-26
      1、细胞培养  24
      2、MTT法测B16黑素瘤细胞的增殖活性  24
      3、多巴氧化法测B16黑素瘤细胞的酪氨酸酶活性  24-25
      4、NaOH裂解法检测B16黑素瘤细胞的黑素含量  25
      5、免疫组化染色  25-26
    (三) 统计学处理  26
  二、实验结果  26-30
    (一) 细胞增殖活力测定  26-27
    (二) 酪氨酸酶活性和黑素含量测定  27
    (三) c-KIT和TRP-2蛋白表达测定  27-30
      1、酪醇作用后c-KIT和TRP-2蛋白表达测定  27-28
      2、胡椒碱作用后c-KIT和TRP-2蛋白表达测定  28-30
  三、分析与讨论  30-33
    (一) c-KIT和TRP-2在白癜风研究中的地位  30
    (二) 女贞子的药性及用药依据  30-31
    (三) 黑胡椒的药性及用药依据  31
    (四) 女贞子和黑胡椒的实验室研究  31-32
    (五) 酪醇和胡椒碱的实验室研究  32
    (六) 本实验结果探讨  32-33
  四、小结  33-34
结论  34-35
参考文献  35-39
附图  39-42
致谢  42-43
文献综述  43-56
硕士研究生在读期间发表论文  56-57
附件  57-82

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中医皮科
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